[發明專利]一種DNA編碼化合物庫的液相色譜純化方法

有效

• 申請號: 201910943404.7
• 申請日: 2019-09-30
• 公開（公告）號: CN112575389B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 蔡玫烜;曾善超;張星河;何文彬;萬金橋;李進
• 申請（專利權）人: 成都先導藥物開發股份有限公司
• 主分類號: C40B50/08
• 分類號: C40B50/08;C40B40/08;G01N30/02;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/74
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明提供了一種用于DNA編碼化合物庫純化的液相色譜純化方法，所述方法為：取DNA編碼化合物或其中間體，利用液相色譜柱進行洗脫，即可；其中，洗脫采用的流動相中，A相含有水、二異丙基乙胺、六氟異丙醇，B相含有甲醇。實驗結果表明，本發明提供的液相純化方法可以有效去除DNA編碼化合物庫合成過程中引入的單段DNA片段，還能夠有效去除多個單段DNA片段相連生成的DNA片段雜質，能夠顯著提升DNA編碼化合物庫的最終產物純度，并顯著減少DNA片段的用量，降低生產成本，具有非常好的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種DNA編碼化合物庫的液相色譜純化方法。

背景技術

在新藥研發領域，針對生物靶標的高通量篩選是快速獲得先導化合物的主要手段之一。然而，基于單個分子的傳統高通量篩選所需時間長、設備投入巨大、庫化合物數量有限(數百萬)，且化合物庫的建成需要數十年的積累，限制了先導化合物的發現效率與可能性。近年來出現的DNA編碼化合物庫技術(WO2005058479、WO2018166532、CN103882532)，結合了組合化學和分子生物學技術，在分子水平上將每個化合物加上一個DNA標簽，能在極短的時間內合成高達億級的化合物庫。而且化合物能夠通過基因測序的方法進行識別，大幅度地增加了化合物庫的大小和合成效率，成為下一代化合物庫篩選技術的趨勢，并開始在制藥行業廣泛應用，產生了諸多積極的效果(Accounts?of?Chemical?Research,2014,47,1247-1255)。

DNA編碼化合物庫(DEL)的構建利用組合化學的“組合-拆分”策略，可快速得到數量巨大的化合物庫，并且化合物中的每一維結構信息都可以由唯一的DNA片段進行標記。在DNA編碼化合物庫的構建過程中，每一維度都需要加入過量的DNA片段進行反應以保證化合物被正確標記。然而過量的DNA片段會繼續與下一維度的DNA片段發生反應，導致后續的磁珠純化不完全，從而影響最終DNA編碼化合物庫的純度。另外由于DNA編碼化合物庫的成本大部分來自于DNA片段，過量的DNA片段會增加下一維度DNA片段的使用量，從而導致構建成本的大幅增加。

中國專利201610229301.0公開了一種固相合成DNA編碼化合物庫的方法，該專利對固相合成DNA編碼化合物生產過程中的粗產物用蒸餾水和0.1M?TEAA(醋酸三乙胺)緩沖溶液洗滌，進行純化。但是，該純化方法僅用于固相合成的純化，并且不能除去未反應的DNA片段。目前液相合成DNA編碼化合物庫常用的純化方法(如TEAA體系)并不能很好地除去未反應的DNA片段，因此，開發一種新的能夠有效除去過量DNA片段的純化方法，能大幅節約構建化合物庫的成本，并且提高DNA編碼化合物庫的純度，可以極大地提高DNA編碼化合物庫的應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種DNA編碼化合物庫的液相色譜純化方法。

本發明提供了一種用于DNA編碼化合物庫純化的液相色譜純化方法，取DNA編碼化合物或其中間體，利用液相色譜柱進行洗脫，即可；其中，洗脫采用的流動相中，A相含有水、二異丙基乙胺、六氟異丙醇，B相含有甲醇。

進一步地，所述流動相中，B相的體積百分數為1％～90％。

進一步地，所述A相由水、二異丙基乙胺和六氟異丙醇組成。

進一步地，所述A相中，異丙基乙胺的體積百分數為0.01～1％，六氟異丙醇的體積百分數為0.5％～10％，其余為水；

優選地，所述A相中，異丙基乙胺的體積百分數為0.05～0.5％，六氟異丙醇的體積百分數為1％～5％，其余為水；

更優選地，所述A相中，異丙基乙胺的體積百分數為0.15％，六氟異丙醇的體積百分數為2.5％，其余為水。

進一步地，所述B相為甲醇。

進一步地，所述方法中，洗脫條件如下：