[發明專利]基于SiO2

有效

• 申請號: 201910939709.0
• 申請日: 2019-09-30
• 公開（公告）號: CN111593095B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 宮曉群;李恒軒;常津;王漢杰;陳明慧
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6825
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 楊歡

1.一種基于SiO₂核酸探針以及雜交鏈信號放大的Ag⁺檢測方法，其特征在于，所述的檢測方法不用于疾病診斷，包括下述步驟：

1）DNA探針與SiO₂微球的偶聯;將氨基化修飾的SiO₂微球與DNA探針P1在偶聯劑作用下進行偶聯，得到SiO₂-P1；

2）定量檢測Ag^+_；將SiO₂-P1與DNA探針P2，加入到緩沖液中，混勻，然后加入雜交鏈反應探針H1和熒光探針Cy5-H2，加入待檢測目標Ag⁺，充分混勻，孵育；在反應完成后，通過使用離心機離心除去上清液，并將沉淀物重懸于水中，測量Cy5熒光信號強度；

DNA探針P1為：TCAGCCCGGC或者AAAAATCAGCCCGGC；DNA探針P2為：AGTCTAGGATTCGGCGTGGGTTAAGCCCCCCTGA或者AGTCTAGGATTCGGCGTGGGTTAAAAAAAGCCCCCCTGA；

在Ag⁺存在時，P1和P2通過形成C-Ag⁺?-C結構結合；?P2的后半部分是雜交鏈式反應的引發鏈，使得?SiO₂-P1-P2耦合物可以連續打開H1和?H2莖環結構來引發HCR，從而使得整個HCR?產物都連接在了SiO2微球上。

2.根據權利要求1所述的基于SiO₂核酸探針以及雜交鏈信號放大的Ag⁺檢測方法,其特征在于，所述的緩沖液為檸檬酸鈉緩沖溶液。

3.根據權利要求1所述的基于SiO₂核酸探針以及雜交鏈信號放大的Ag⁺檢測方法,其特征在于，步驟2）的具體步驟為：將步驟1）中連接的10μL?DNA-SiO₂探針和0.7μL?10μmol/LDNA探針P2加入到25μL檸檬酸鈉SSC緩沖液中，充分混勻，然后加入1.5μL的1μM雜交鏈反應探針H1和1.5μL的1μmol/L?Cy5-H2；最后，加入目標Ag⁺，充分混勻，在37°C下孵育60分鐘；在反應完成后，通過使用離心機以11,000rpm離心10分鐘，除去上清液，并將沉淀物重懸于50μL水中，并通過AzureC600測量Cy5熒光信號強度。