[發(fā)明專利]一種鳶尾輻射誘變劑量篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910933472.5
• 申請日: 2019-09-29
• 公開（公告）號: CN110476817A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發(fā)明（設計）人: 周琳;蔡友銘;張永春;楊柳燕;陳敏敏;李青竹
• 申請（專利權）人: 上海市農業(yè)科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 32335 南京華恒專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 裴素艷<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發(fā)明公開了一種鳶尾輻射誘變劑量篩選方法，通過構建鳶尾無性系組培苗，并將鳶尾無性系組培苗,用不同劑量進行輻射誘變處理，輻射處理后繼續(xù)培養(yǎng)，選取誘變處理40天時的組培苗，測定丙二醛(MDA)含量、超氧陰離子自由基(O₂^－·)產生速率、H₂O₂含量、抗氧化酶(SOD、CAT)活性，通過測定誘變處理后40天時的MDA和H₂O₂含量、O₂^－·產生速率、SOD和CAT活性判斷適宜的誘變劑量，指標測得值越大，對應材料成活率越低，對應的輻射誘變劑量越不合適，測得值越小，成活率越高，對應的輻射誘變劑量越合適。本發(fā)明先構建鳶尾無性系組培苗作為誘變材料，克服了雜交后代種子為誘變材料時本身存在一定的性狀分離的問題，通過輻射誘變后，鳶尾組培苗生理生化指標與成活率的相關性分析，篩選出評價誘變系成活率相關的生理生化指標，用于篩選鳶尾適宜誘變劑量。

技術領域

本發(fā)明涉及輻射誘變育種領域，具體涉及一種鳶尾輻射誘變劑量篩選方法。

背景技術

鳶尾是鳶尾科(Iridaceae)鳶尾屬(Iris L.)多年生草本植物，鳶尾通常花冠較大、花色較艷、花型奇特，具有較高觀賞價值。

目前，國內外鳶尾屬植物的育種主要有常規(guī)雜交育種、體細胞雜交、倍性育種、輻射育種、轉基因技術等。其中雜交育種作為植物育種的常用技術，但大量的研究結果表明鳶尾屬品種多為近緣種間、品種間雜交產生，遠緣種間雜交較少，然而遠緣種間雜交可為觀賞性、適應性等方面提供更大潛力。然而，鳶尾屬染色體數目變化較大，導致遠緣種間雜交不易結實，限制了鳶尾屬遠緣雜交育種的進程。

近年來，誘變育種因其簡便、安全、經濟和突變率高的優(yōu)勢，且產生的變異穩(wěn)定較快，可在短時間內育出新品種，而備受育種工作者重視。常用的誘變育種方法包括化學誘變、輻射誘變、航空誘變等，其中輻射誘變育種因其突變率一般可達千分之幾，甚至百分之幾，比自然突變率高千百倍，并可引起植物形態(tài)結構和并可引起植物形態(tài)結構和生理生化多方面的變異，由于觀賞植物的色澤、大小、類型易于選擇，很多材料在遺傳上是高度雜合的，易獲得高的突變頻率，更適合于人們在培育觀賞植物時求新求異的特點。因此，輻射誘變成為目前觀賞植物品種培育和改良中一種非常重要的方法和手段(田杰等,2012)，且經過幾十年的發(fā)展，僅我國就已對40多種花卉進行輻射育種和改良，且已成功獲得60多個突變種，其中包括我國的名花，如菊花、蘭花、百合、月季、觀賞性海棠、水仙和蝴蝶蘭等(趙利坤和強繼業(yè),2013)。

輻射誘變所使用的輻射源常用的有γ射線、中子、X射線、β射線以及非電離輻射的紫外線和激光。⁶⁰Co-γ射線是花卉和農作物上最常用的輻射誘變源，不同物種間，同一物種不同品種和不同組織，其最適的⁶⁰Co-γ射線劑量存在較大差異，輻射誘變劑量過高則導致致死率過高，誘變劑量過低則可能未能獲得足夠的新種質。

簡單重復序列(Simple Sequence Repeats，SSR)，也稱為微衛(wèi)星DNA，SSR原理是根據微衛(wèi)星序列兩端互補序列設計引物，對模板DNA進行PCR擴增的產物用瓊脂糖凝膠或者聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，根據擴增產物的大小確定基因型及計算等位基因頻率。與其它分子標記技術相比，由于微衛(wèi)星呈共顯性遺傳，因此可鑒別雜合子和純合子；另外還具有DNA用量少，DNA質量要求不高，快速簡便，重復性好等優(yōu)點。目前，SSR標記已成功用于平菇、狼尾草屬牧草、高羊茅、紫花苜蓿等不同物種的誘變系鑒定。

隨著組培快繁技術的成熟，可利用組培快繁技術構建鳶尾種質資源無性系，既可用于后續(xù)誘變育種，又利于后期誘變系的表型鑒定。對誘變的材料，通過生理生化的測定，能快速篩選出合適的輻射誘變劑量，可為科研工作人員在鳶尾新品種的選育方面減輕工作量，縮短育種時間，加快鳶尾新優(yōu)品種的選育進程。

發(fā)明內容

為了克服現有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種鳶尾輻射誘變劑量篩選方法。