[發明專利]一種曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP及其在血吸蟲病免疫診斷中的應用

在審

• 申請號: 201910929080.1
• 申請日: 2019-09-28
• 公開（公告）號: CN110627910A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 劉帥;陳啟軍;侯楠;樸賢玉
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院病原生物學研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 11531 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 于鵬

本發明公開了一種曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP及其在血吸蟲病免疫診斷中的應用。本發明的曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP，可通過基因工程技術進行大規模標準化批量生產，抗原質量穩定，結果重復性好。本發明的曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP，既可用于曼氏血吸蟲病免疫診斷又可用于埃及血吸蟲病免疫診斷，且具有極高的靈敏度。本發明的曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP抗原成分單一，SmSAP?ELISA對血吸蟲病免疫診斷具有極好的特異度，且不與其他寄生蟲病患者血清發生交叉反應，應用前景廣闊。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種曼氏血吸蟲重組融合蛋白 SmSAP及其在血吸蟲病免疫診斷中的應用。

背景技術

血吸蟲病是一種嚴重威脅人類健康的傳染性寄生蟲疾病，主要流行于亞非拉的76個國家和地區，全球血吸蟲感染人數超2億人。寄生于人體的血吸蟲主要有6種，包括日本血吸蟲、曼氏血吸蟲、埃及血吸蟲、間插血吸蟲、湄公血吸蟲和馬來血吸蟲，其中以日本血吸蟲、曼氏血吸蟲和埃及血吸蟲引起的血吸蟲病流行范圍最廣其危害最大。日本血吸蟲病主要流行于我國長江流域及東南亞等國家，曼氏血吸蟲主要流行于非洲及南美洲等國家，埃及血吸蟲主要流行于非洲及中東地區。隨著經濟全球化的不斷推進，中非貿易和援外項目增多，出國務工和旅行人員日增加，我國輸入性曼氏血吸蟲病例和埃及血吸蟲病例呈逐年增加趨勢。

目前，我國對輸入性血吸蟲病病例的診斷多依賴于傳統的形態學檢測方法。這種方法主要通過檢查病人腸道組織、糞便或尿液中的血吸蟲蟲卵來確診疾病，不但費時費力，而且對輕度血吸蟲感染病例診斷的靈敏度較低，極易漏檢輕度感染血吸蟲病人。

相比于形態學診斷方法，免疫學診斷方法具有操作簡便快捷和靈敏度高等優點。但是，目前用于血吸蟲病免疫學診斷的最常用的抗原是血吸蟲蟲體混合抗原組分，例如蟲卵可溶抗原，成蟲可溶抗原等，由于這種粗提抗原的成分復雜，容易與其他寄生蟲病人血清發生交叉反應，導致該類血吸蟲病診斷方法的特異性不足，且生產的試劑不宜標準化。

依靠基因工程技術生產的血吸蟲重組抗原具有成分單一、交叉反應少、可大規模批量生產等優點，被認為是理想的血吸蟲病診斷抗原分子。近幾年，我國科學家報道了多個日本血吸蟲病免疫診斷抗原，例如SjSP-13、SjSAPLP4和SjSAPLP5抗原，以該類抗原建立的酶聯免疫吸附試驗 (Enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA)診斷方法對日本血吸蟲病診斷具有極高的靈敏度和特異度。但是，由于日本血吸蟲蛋白與曼氏血吸蟲同源蛋白的序列同存在較大差異，因此已有的日本血吸蟲病免疫診斷方法不能完全滿足曼氏血吸蟲病免疫診斷需求。

曼氏血吸蟲基因組的破譯為血吸蟲病防治的研究提供了空前豐富的信息資源和平臺。本發明利用生物信息學方法對曼氏血吸蟲全基因組編碼基因預測分析發現曼氏血吸蟲基因組中存在一個鞘脂激活蛋白樣蛋白 (Schistosoma mansoni Saposin-likeprotein，SmSAP)基因家族，其編碼蛋白中含有一個或多個SapB保守功能結構域。本發明利用基因合成方法將其中兩個SmSAP基因進行基因融合并構建重組融合蛋白表達載體，并利用原核表達系統進行重組蛋白制備，ELISA試驗確認所得重組融合蛋白用于曼氏血吸蟲病和埃及血吸蟲病的免疫診斷具有高靈敏度和特異度，是潛在的輸入性血吸蟲病免疫診斷抗原候選靶標，從而完成了本發明。

發明內容

本發明的目的是提供一種曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP及其制備方法，本發明的另一目的是提供曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP在血吸蟲病免疫診斷中的應用，為此還提供了一種具有高靈敏度和特異度的輸入性血吸蟲病免疫診斷試劑盒。

為了實現上述目的，本發明提供的技術方案如下：

本發明首先提供了一種經大腸桿菌密碼子優化的曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，其編碼的曼氏血吸蟲重組融合蛋白SmSAP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。