[發明專利]一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法

在審

• 申請號: 201910925248.1
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110658274A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 馬學琴;張波;李艷婷;趙小軍;李楠;楊玲玲
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;G01N21/33
• 代理公司: 11465 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 趙徐平

1.一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

S1 配制對照品溶液

分別稱取對照品，對照品包括麻醉椒苦素、二氫麻醉椒苦素、醉椒素、二氫醉椒素、麻醉椒素、去甲氧基醉椒素、卡瓦胡椒素A和黃卡瓦胡椒素B；分別向對照品加入溶劑制成對照品貯備液；

S2 各對照品相對校正因子的測定

向對照品貯備液中加入溶劑稀釋得對照品稀釋液，分別測定對照品稀釋液吸光度值，由吸光度值分別計算對照品的百分吸收系數；并根據結果在所述對照品中選取一參照物，分別計算對照品的百分吸收系數和參照物的百分吸收系數的比值得到相對校正因子；

S3 樣品溶液的配制

取待測樣品制備樣品溶液；

S4 液相色譜檢測

分別將樣品溶液和對照品貯備液進行液相色譜檢測，分別得到包括參照物在內的各對照品和樣品色譜峰的保留時間，分別計算各對照品色譜峰保留時間與參照物色譜峰保留時間的比值得到對照品的相對保留時間，由對照品相對保留時間確定樣品溶液檢測色譜峰中各成分的歸屬，同時讀取樣品溶液檢測結果中各待測成分色譜峰的峰面積以及參照物色譜峰的峰面積；

S5 成分含量的計算

由相對校正因子、樣品溶液中各待測成分色譜峰峰面積、參照物貯備液的濃度和樣品溶液中參照物色譜峰的峰面積分別計算樣品中麻醉椒苦素、二氫麻醉椒苦素、醉椒素、二氫醉椒素、麻醉椒素、去甲氧基醉椒素、卡瓦胡椒素A、黃卡瓦胡椒素B的含量。

2.根據權利要求1所述的一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，步驟S1和步驟S2中所述溶劑相同，包括甲醇、乙醇或水中的至少一種。

3.根據權利要求2所述的一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，步驟S1中加入溶劑分別制成濃度約為0.1-1mg/ml的對照品貯備液。

4.根據權利要求1所述的一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，步驟S2中吸光度值檢測的波長與步驟S4中液相色譜檢測的波長相同，為232nm。

5.根據權利要求4所述的一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，步驟S2中分別將各對照品稀釋液加入至比色皿中，置于紫分光光度計中，測定各對照品稀釋液在232nm處的吸光度值為0.3-0.8。

優選的，步驟S2中對照品的百分吸收系數根據朗伯比耳定律計算得到，具體的計算公式為：

A＝ECL，

所述A為各對照品貯備液的吸光度值，所述C為各對照品貯備液的濃度，所述L為測定的液膜厚度；

所述相對校正因子的計算公式是：

f_s/x＝E_s/E_x，

所述f_s/x是各成分相對校正因子，E_s為參照物的百分吸收系數，E_x為待測成分的百分吸收系數。

6.根據權利要求1所述的一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，步驟S3具體為：取待測樣品精密稱量，加入10-50倍量的溶劑經過回流、超聲或冷浸處理，過濾得到澄清的樣品溶液，所述溶劑包括甲醇、乙醇或水中的至少一種。

7.根據權利要求1或4所述的一種卡瓦胡椒藥材中有效成分定量檢測方法，其特征在于，步驟S4中所述液相色譜檢測的色譜條件是：填料為C18的色譜柱，色譜柱內徑為2.1mm，且長度為100mm，填料粒徑為1.7μm，洗脫條件為洗脫液A-洗脫液B-洗脫液C，梯度洗脫：0～5min洗脫液A為70～75％，洗脫液B為10％，洗脫液C為20～15％；5～11min洗脫液A為75～65％，洗脫液B為10％，洗脫液C為15～25％；11～15min洗脫液A為65～45％，洗脫液B為10％，洗脫液C為25～45％；15～18min洗脫液A為45～70％，洗脫液B為10％，洗脫液C為45～20％；流速為0.2ml/min；進樣量：1μl；柱溫：35℃；檢測波長232nm；所述洗脫液A為濃度為0.1％乙酸水溶液，所述洗脫液B為乙腈，所述洗脫液C為異丙醇。