[發明專利]一種誘導增強CIK細胞的滇重樓多糖組合物及其應用

在審

• 申請號: 201910922512.6
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110592015A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 劉長寧;李菁;胡翔;黃招琴;馬菊蓮
• 申請（專利權）人: 中國科學院西雙版納熱帶植物園;云南煜欣農林生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 11587 北京匯知杰知識產權代理有限公司
• 代理人: 柴春玲;楊巍

本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種中藥誘導增強CIK細胞活性的方法，該方法包括向CIK細胞培養液加入重樓與麥冬提取物，所述重樓提取物為滇重樓多糖，所述麥冬提取物為麥冬多糖，該方法能激活CIK細胞增殖活性與殺瘤活性，提高CIK細胞在體外的殺瘤效果，且通過該方法能獲得大量CIK細胞，節省細胞培養時間，利用該方法制備得到的增強型CIK細胞能用于肝臟腫瘤的治療。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種誘導增強CIK細胞的滇重樓多糖組合物及其應用。

背景技術

肝臟具有分泌、排泄、合成、生物轉化及免疫等多種生理功能，是重要的人體器官。我國是乙肝大國，中國的慢性乙肝病人中，約25％-40％最終將死于肝硬化或合并肝癌。原發性肝癌發病隱匿,是臨床常見的惡性腫瘤，絕大多數患者確診時已屬晚期。目前常規的手術和放化療等治療方法均不能徹底清除體內的癌細胞，體內回輸免疫活性細胞的過繼免疫治療法可以直接殺傷肝癌細胞，還可調節和增強機體免疫力，從而成為肝癌治療的重要輔助手段。

我國對原發性肝癌患者進行CIK細胞續灌輸入治療這一治療方案正在逐漸普及(第三軍醫大學學報，2015，37(23):2386-2390)。肝癌患者多伴有免疫缺陷，容易致使腫瘤轉移、復發。CIK細胞在免疫調節及抗腫瘤免疫治療中有著重要作用，CIK細胞不僅直接殺傷殘余癌細胞，還通過分泌炎癥細胞因子如IL-2等改善肝癌患者免疫功能，是惡性腫瘤過繼治療的重要手段之一，其治療效果與細胞輸注劑量、效應細胞比例和對腫瘤細胞毒性有著密切關系。CIK細胞的增殖和殺瘤活性依賴于多種細胞因子及外源因子的刺激，因此CIK細胞在臨床上應用受到其在體外增殖活性及體內殺瘤活性的限制，提高其體外的增殖活性和體內殺瘤活性具有重要臨床應用價值。

發明內容

本發明人發現中藥提取組合物可誘導增強型CIK細胞。為培養出具有更高效殺瘤活性又能大量擴增的CIK細胞，本發明的目的在于提供一種中藥誘導增強型CIK細胞的制備方法，該方法能促進CIK細胞體外高效擴增，同時提高了CIK細胞體外殺傷肝臟腫瘤細胞的效率，將得到的CIK細胞可以應用于肝臟腫瘤疾病的細胞治療。

在第一方面，本發明提供了一種CIK細胞培養基，所述CIK細胞培養基包括：滇重樓多糖和麥冬多糖。

在一個實施方案中，所述滇重樓多糖在CIK細胞培養液中的作用濃度為50μg/mL～300μg/mL，麥冬多糖在CIK細胞培養液中的作用濃度為100μg/mL～300μg/mL。

在一個實施方案中，所述CIK細胞培養基還包括無血清基礎培養基和細胞因子。

在一個實施方案中，所述CIK細胞培養基還包括血清。優選地，所述血清在無血清基礎培養基中的體積百分含量約為10％。

在第二方面，本發明提供了一種滇重樓多糖與麥冬多糖組合物誘導增強型CIK細胞的制備方法，包括如下步驟：

(1)將外周血單個核細胞(PBMC)誘導培養成CIK細胞；

(2)將所述CIK細胞培養至7-9天時，在含滇重樓多糖和麥冬多糖混的CIK細胞培養基中培養72h以上。

在一個實施方案中，滇重樓多糖的濃度為50ug/mL～300ug/mL和所述麥冬多糖的濃度為200ug/mL。

在第三方面，本發明提供了根據本發明第二方面的方法制備的CIK細胞。

在第四方面，本發明提供了一種滇重樓多糖和麥冬多糖在制備免疫細胞培養基中的應用。

具體實施方式