[發明專利]一種真菌毒素殼聚糖免疫親和吸附劑的制備方法及用途

在審

• 申請號: 201910921806.7
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110538640A
• 公開（公告）日: 2019-12-06
• 發明（設計）人: 王云;牛瑞;張成;羅世龍;王姝文;楊雅梅
• 申請（專利權）人: 江蘇大學;中儲糧鎮江糧油質量檢測中心有限公司
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/28;B01J20/30;B01D15/08
• 代理公司: 32382 南京智造力知識產權代理有限公司
• 代理人: 馮燕平<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明公開了一種真菌毒素殼聚糖免疫親和吸附劑的制備方法及用途，屬于天然多糖開發應用和功能材料制備技術領域。配制殼聚糖溶液和由液體石蠟、乳化劑span 80以及石油醚組成的油相，將殼聚糖溶液倒入膜乳化儀進料池中，調節氮氣壓力以及油相的磁力攪拌轉速，使殼聚糖溶液在氮氣壓力下緩慢通過SPG膜孔并被壓入油相中，乳化結束后加入交聯劑進行攪拌交聯，再經過石油醚洗、乙醇洗、水洗、還原、再水洗后得到殼聚糖微球；將殼聚糖微球與真菌毒素抗體進行偶聯，蒸餾水和PBS洗滌，最終得到殼聚糖微球免疫親和吸附劑。制備的殼聚糖微球免疫親和吸附劑，微球粒徑大小均一，且具有較寬的pH穩定性，能用于凈化分離和測定食品樣品中的真菌毒素。

技術領域

本發明涉及一種真菌毒素殼聚糖免疫親和吸附劑的制備方法及用途，屬于天然多糖開發應用和功能材料制備技術領域。

背景技術

真菌毒素廣泛污染糧食、油料、和食品等植物源性產品，對人類健康存在巨大威脅，對動物和人類有致癌、致畸、致基因突變作用。在危害較為嚴重的真菌毒素中，以黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、嘔吐毒素和伏馬毒素等最具代表性。世界衛生組織(WHO)也于2002年將真菌毒素對農產品的污染列為引起食源性疾病的重要根源。目前，農產品中真菌毒素殘留檢測以HPLC和HPLC-MS等儀器分析方法為主。由于農產品樣品基質復雜、真菌毒素含量低，因此在進行儀器分析檢測前通常需要對樣品進行凈化處理。免疫親和色譜(IAC)利用抗原-抗體特異性可逆結合，實現目標物的濃縮分離，具有選擇性高、操作簡便快速等優點，因而被公認為最理想的樣品前處理方法。

目前最常用的商品化色譜填料載體是瓊脂糖凝膠，性能穩定且具有良好的生物相容性，但在活化和再生過程中需要用到劇毒的溴化氰，價格也過于昂貴。因此，尋找開發一種性能優良且經濟實用的色譜填料載體是目前許多實驗室致力研究的方向。

殼聚糖，幾丁質脫乙酰產物，自然界中僅次于纖維素的第二大天然多糖，來源豐富，具有安全無毒、易降解、良好的生物相容性等優點。此外，殼聚糖表面含有大量的可修飾功能基團(羥基和氨基)，可以通過酰化、羥基化、醚化、希夫氏反應、酯化、水解等反應制備出各種衍生物。因而，殼聚糖不僅是一種天然資源，更是一種新材料在醫藥、化工、農業等領域有著良好的應用前景。目前制備得到的殼聚糖微球為載體的色譜填料在微球大小均一性、酸性條件下的穩定性等方面尚存在著一些不足，限制了它的應用。為了解決這一問題，本發明通過優化改良殼聚糖微球制備方法，并將其與真菌毒素抗體結合，獲得了一種pH穩定、粒徑均一殼聚糖微球為載體的免疫親和吸附劑，利用所得的免疫親和吸附劑對農產品中的真菌毒素殘留進行凈化分離和分析測定。

發明內容

本發明的目的在于提供一種真菌毒素殼聚糖免疫親和吸附劑的制備方法，用該方法制備的免疫親和吸附劑對農產品中的真菌毒素殘留進行濃縮凈化。

本發明中殼聚糖微球的制備采用膜乳化法，以殼聚糖為原料，戊二醛飽和的甲苯溶液為交聯劑，span 80為乳化劑。理化表征分析顯示，殼聚糖微球粒徑大小均一，且在pH4-10范圍內穩定。將所得的殼聚糖微球與真菌毒素抗體偶聯得到的免疫親和吸附劑，并將其用于實際樣品中真菌毒素殘留的凈化分離和分析測定。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種pH穩定、粒徑均一殼聚糖微球免疫親和吸附劑的制備方法，按照下述步驟進行：

(1)配制殼聚糖溶液和由液體石蠟和石油醚組成的油相，將殼聚糖溶液倒入膜乳化儀進料池中，調節氮氣壓力以及連續相磁力攪拌轉速，使殼聚糖溶液在氮氣壓力下緩慢通過SPG膜孔并被壓入油相中，乳化結束后加入交聯劑進行攪拌交聯，再經過石油醚洗、乙醇洗、水洗、還原、再水洗后得到殼聚糖微球；

(2)將步驟(1)中制備的殼聚糖微球與真菌毒素抗體進行攪拌偶聯，蒸餾水和PBS洗滌后得到免疫親和吸附劑。

本發明步驟(1)中，所述的殼聚糖分子量100kD，殼聚糖濃度以質量比計為1％。