[發明專利]一種檢測肺動脈高壓病的Caveolin-1基因探針組及其應用

在審

• 申請號: 201910920901.5
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110669837A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 盧文菊;王健;陳靈丹
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學附屬第一醫院(廣州呼吸中心)
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 44104 廣州知友專利商標代理有限公司
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

本發明公開了一種檢測肺動脈高壓病的Caveolin?1基因探針組，所述基因探針組是用于檢測細胞質膜微囊蛋白?1(Caveolin?1)基因突變的基因探針組合物，所述基因探針組合物由237條探針組成，本發明還公開了上述Caveolin?1基因探針組在制備肺動脈高壓病的診斷試劑盒方面的應用以及利用上述Caveolin?1基因探針組進行的非疾病診斷治療目的的肺動脈高壓病的基因突變體外檢測方法。

技術領域

本發明屬于基因突變技術領域，具體涉及一種檢測肺動脈高壓病的Caveolin-1基因探針組及其應用。

背景技術

肺動脈高壓(PH)是一種在靜息狀態下，經右心導管檢測平均肺動脈壓力≥20mmHg的肺血管疾病。美國50家醫院入院記錄數據顯示特發性和家族性PH人數占PH患者總人數的49.7％，其中部分特發性和家族性PH患者是細胞質膜微囊蛋白-1(Caveolin-1)基因突變攜帶者。因此設計用于BMPR2基因突變檢測的基因探針對于PH精準診療具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測肺動脈高壓病的Caveolin-1基因探針組。

本發明的目的還在于提供上述Caveolin-1基因探針組在制備肺動脈高壓病的診斷試劑盒方面的應用。

本發明的最后一個目的在于提供一種非疾病診斷治療目的的肺動脈高壓病的基因突變體外檢測方法。

本發明的上述第一個目的是通過如下技術方案來實現的：一種檢測肺動脈高壓病的Caveolin-1基因探針組，所述基因探針組是用于檢測細胞質膜微囊蛋白-1(Caveolin-1)基因突變的基因探針組合物，所述基因探針組合物由以下237條探針組成，具體如下所示(基因探針在人類參考基因組HG19對應染色體上的位置)：

本發明中的Caveolin-1基因探針組是用于肺動脈高壓相關基因Caveolin-1基因突變檢測的探針組合，該基因探針組包括針對Caveolin-1基因5’UTR區、外顯子區、剪切區和3’UTR區的一組探針組合物。

優選的，所述探針組合物覆蓋上述Caveolin-1基因的外顯子區和表達調控區，是用于檢測Caveolin-1基因的致病堿基突變如堿基替換、基因缺失、基因插入的探針組合物。

優選的，所述探針組合物中每兩個相鄰的探針序列之間存在重疊，每兩個相鄰的探針序列之間的重疊的長度為每條探針長度的1/2～2/3，在每條探針上形成兩層或三層的探針覆蓋區域。

本發明的上述第二個目的可以通過如下技術方案來實現：上述Caveolin-1基因探針組在制備肺動脈高壓病的診斷試劑盒方面的應用。

本發明的上述最后一個目的可以通過如下技術方案來實現：一種非疾病診斷治療目的的肺動脈高壓病的基因突變體外檢測方法，包括以下步驟：

(1)提取受試者的基因組DNA，或者提取受試者的RNA，反轉錄成cDNA；

(2)將所述DNA或cDNA打斷至150-200bp的范圍；

(3)對上述打斷的DNA采用illumina TruSeq DNA library preparation試劑盒，進行DNA小片段文庫的制備；

(4)將DNA小片段文庫和上述的Caveolin-1基因探針組進行雜交，檢測基因突變。

本發明的優點是：相對于全基因組測序，大大節約了所需要的測序數據量；一次性檢測致病基因的所有突變，實現對疾病基因診斷的零遺漏，為疾病的治療和干預提供保障；高深度的測序，實現對基因突變的高準確性檢測；成本低，對測序數據量要求不高；高深度測序實現對突變檢測的準確性。