[發明專利]一種基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器

在審

• 申請號: 201910920411.5
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN112557474A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 陳輝;謝國明;張馨
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法包括以下步驟：

(1)鋯金屬有機框架納米材料的制備 首先，將80mg 2，2′-聯吡啶-5，5′-二羧酸和26.12mg的四氯化鋯分別分散在6mL和12mL的N，N-二甲基甲酰胺中，二者都超聲處理5分鐘，然后將兩種反應物混合在20mL體系的反應釜中；隨后加入1.5mL的乙酸(99.99％)，再超聲處理5分鐘，使得上述混合溶液充分混勻。然后在120℃條件下加熱和攪拌16小時。最后，在9000rpm(5450rcf)條件下離心10分鐘，用乙醇洗滌三次，最終得到白色固體。

(2)銅改性鋯金屬有機框架納米材料的制備 準備一個50mL的圓底燒瓶，將30mg的鋯金屬有機框架納米材料溶解在5mL的四氫呋喃中，超聲處理5分鐘；隨后將10.60mg二水氯化銅超聲處理5分鐘，再加入到上述鋯金屬有機框架納米材料溶液中，然后在室溫條件下充分攪拌2小時。最后，在9000rpm(5450rcf)轉速下離心5分鐘，并用乙醇洗滌三次，然后用2mL的N，N-二甲基甲酰胺重新懸浮以獲得銅改性鋯金屬有機框架納米材料溶液。將溶液在4℃條件下避光保存。

(3)核酸功能化銅改性鋯金屬有機框架納米探針的制備 首先，取步驟(2)中得到的銅改性鋯金屬有機框架納米材料溶液100uL，于9000rpm(5450rcf)條件下離心5分鐘，將上清液棄去，剩余物再懸浮于460uL的N，N-二甲基甲酰胺中。然后將20uL銅綠假單胞菌特異性識別適配體(10umol/L)和20uL短核酸鏈(umol/L)加入到上述銅改性鋯金屬有機框架納米材料溶液中，混合物在37℃下攪拌過夜。最后核酸功能化銅改性鋯金屬有機框架納米探針通過三次的9000rpm(5450rcf)離心5分鐘，用乙醇洗滌。然后將產物用100uL的N，N-二甲基甲酰胺于4℃條件下避光儲存，以備將來使用。

(4)高導電性的Super P/AuNPs的制備 首先，為了得到高度均勻的Super P懸浮液(1mg/mL)，將4.0mg Super P通過超聲1小時，使其均勻分散到4.0mL的殼聚糖溶液(0.5％)中。然后準備AuNPs，加熱攪拌100mL氯金酸(0.01％)并煮沸15分鐘，然后將1mL檸檬酸三鈉(2％)溶液緩慢加至上述溶液中，繼續攪拌5分鐘，直到顏色從淡黃色變為酒紅色。最后，將AuNPs溶液冷卻至室溫，并在4℃下儲存。

2.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法步驟(1)中所用的乙酸所用量是1.5mL(99.99％)。

3.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法步驟(1)中混合溶液最終反應的條件是120℃加熱和攪拌16小時。

4.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法步驟(2)中反應條件為室溫下充分攪拌2小時。

5.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法步驟(3)中所用的銅綠假單胞菌特異性識別適配體和短核酸鏈重懸條件為PBS(0.01mol/L，pH 7.4)。

6.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法步驟(3)中所用的銅綠假單胞菌特異性識別適配體和短核酸鏈的濃度為10umol/L。

7.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器其制備方法步驟(4)中Super P懸浮液的濃度為1mg/mL。

8.如權利要求1所述的基于新型復合納米材料快速靈敏檢測銅綠假單胞菌的電化學傳感器，其制備方法步驟(4)中檸檬酸三鈉的濃度是(1mL，2％)。