[發明專利]一種僵蠶及其偽品的指紋圖譜鑒別方法

有效

• 申請號: 201910920026.0
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110824032B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 李敏;陳輝;陳蓉;王梅;敬勇;蔡曉洋
• 申請（專利權）人: 成都中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明公開了一種僵蠶及其偽品的指紋圖譜檢測方法，它是采用高效液相色譜法檢測，包括如下步驟：1)對照品溶液制備：取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、山奈酚對照品，加甲醇溶解，即得對照品溶液；2)供試品溶液制備：取待檢樣品，加甲醇提取，即得供試品溶液；3)分別吸取對照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。本發明的檢測方法，可以檢測蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、山奈酚，也可用于僵蠶的檢測，結果可靠，且本發明的鑒別方法專屬性強，精密度好，重復性好，準確度高，可實現僵蠶真偽的準確鑒別。

技術領域

本發明具體涉及一種僵蠶及其偽品的指紋圖譜鑒別方法。

背景技術

僵蠶為蠶蛾科昆蟲家蠶Bombyx mori L 4～5齡的幼蟲感染(或人工接種)白僵菌Beauveria bassiana(Bals)Vuill而致死的干燥體，具有息風止痙，祛風止痛，化痰散結之功效，是常用動物類中藥材。常用于肝風夾痰，驚癇抽搐，小兒急驚，破傷風，中風口風熱頭痛，目赤咽痛，風疹瘙癢，發頤痄腮。

傳統的偽品僵蠶大多為用石灰水將家蠶摻白加工而成，也有將地蠶冒充正品僵蠶使用，由于這些偽品外觀、顯微形態均與正品相似，難以用常規方法，進行有效鑒別。

《中國藥典》2015版鑒別項下，只收載其粉末的顯微鑒別，該鑒別方法已有研究報道其準確度不高。現有文獻中，也有用薄層色譜鑒別僵蠶，如張麗增等.僵蠶薄層鑒別方法的改進[J].中國藥品標準,2016,7(4):61-62,該方法只利用僵蠶中的一種特征成分進行鑒別，而偽品種類多，只通過一種特征成分鑒別同樣易造成錯檢，為患者的用藥帶來隱患。而目前還沒有通過高效液相色譜法的指紋圖譜鑒別僵蠶及其偽品的報道。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種僵蠶及其偽品的指紋圖譜檢測方法，它是采用高效液相色譜法檢測，包括如下步驟：

1)對照品溶液制備：取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、山奈酚對照品，加甲醇溶解，即得對照品溶液；

2)供試品溶液制備：取待檢樣品，加甲醇提取，即得供試品溶液；

3)分別吸取對照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖；色譜條件如下：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長：365nm和/或285nm；流動相：以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B；梯度洗脫程序如下：

進一步地，步驟1)所述對照品溶液每1ml含蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、山奈酚各5～15μg，優選10μg。

進一步地，步驟2)所述待檢樣品與甲醇的質量體積比為2g：20ml。

進一步地，步驟2)所述甲醇濃度為75-95％(v/v)，優選80％。

進一步地，步驟2)所述提取為超聲提取，功率250W，頻率100kHz，時間30min。

進一步地，步驟3)所述色譜條件中柱溫30℃，進樣量10μL，體積流量為0.8mL·min^-1。

本發明還提供了一種僵蠶及其偽品的鑒別方法，它包括如下步驟：

a、取待檢僵蠶或僵蠶偽品；

b、按前述方法檢測；

c、分析指紋譜圖。

進一步地，所述檢測波長365nm下的指紋圖譜中有9個特征峰顯示為僵蠶，僅有2個特征峰顯示為僵蠶偽品；所述9個特征峰中包含蘆丁、金絲桃苷、槲皮素和山奈酚參照物相應的峰；所述2個特征峰與9個特征峰的峰8和峰9相應。