[發明專利]一種利用固定化α-葡萄糖苷酶制備黑曲霉低聚糖的方法

有效

• 申請號: 201910917312.1
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110592061B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 江波;張濤;王曉燕
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N11/082
• 分類號: C12N11/082;C12P19/14
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

1.一種固定化α-葡萄糖苷酶，其特征在于，所述固定化α-葡萄糖苷酶按照如下方法制備：

（1）樹脂預處理；

（2）向經過預處理的樹脂中加入α-葡萄糖苷酶，進行吸附；

（3）向步驟（2）吸附后的體系，加入戊二醛，進行交聯；

（4）將步驟（3）交聯后的溶液離心棄上清，用緩沖液反復洗滌，直至洗滌液中檢測不到酶活，即得到固定化酶；

所述樹脂為陰離子交換樹脂Amberlite FPA90 Cl；所述緩沖液為pH為7.0~8.5、濃度為45~55 mmol/L的磷酸鹽緩沖液；所述戊二醛以體積比為0.01~0.08%的量加入；

所述樹脂的添加量為0.5 g，添加的α-葡萄糖苷酶總酶活為52~156 U；

所述吸附是在20~25℃、200~220 r/min條件下吸附3~6 h；

所述交聯是于3~5℃靜置交聯1~3 h。

2.如權利要求1所述的固定化α-葡萄糖苷酶，其特征在于，所述樹脂預處理的步驟包括：用2~3倍樹脂體積的90~95%乙醇浸泡20~24 h，棄雜液，洗去雜質和浮色，直至溶液pH為6.5~7.5；以0.8~1.2 mol/L NaOH浸泡樹脂4~6 h，洗滌，直至溶液pH為6.5~7.5；再以0.8~1.2 mol/L HCl浸泡樹脂4~6 h，洗滌，直至溶液pH為6.5~7.5。

3.權利要求1或2所述的固定化α-葡萄糖苷酶在生產黑曲霉低聚糖中的應用，其特征在于，以固定化α-葡萄糖苷酶為催化劑，以麥芽糖為底物，制備黑曲霉低聚糖。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述麥芽糖的濃度為200~400 g/L，固定化α-葡萄糖苷酶的添加量為5~20 U/g麥芽糖，反應條件為55~75℃條件下反應20~48 h。

5.制備權利要求1所述固定化酶的方法，其特征在于，所述方法為：（1）樹脂預處理；

（2）向經過預處理的樹脂中加入α-葡萄糖苷酶，進行吸附；

（3）向步驟（2）吸附后的體系，加入戊二醛，進行交聯；

（4）將步驟（3）交聯后的溶液離心棄上清，用緩沖液反復洗滌，直至洗滌液中檢測不到酶活，即得到固定化酶；

所述樹脂為陰離子交換樹脂Amberlite FPA90 Cl；所述緩沖液為pH為7.0~8.5、濃度為45~55 mmol/L的磷酸鹽緩沖液；所述戊二醛以體積比為0.01~0.08%的量加入；

所述樹脂的添加量為0.5 g，添加的α-葡萄糖苷酶總酶活為52~156 U；

所述吸附是在20~25℃、200~220 r/min條件下吸附3~6 h；

所述交聯是于3~5℃靜置交聯1~3 h。