[發明專利]基于RCA擴增的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法

在審

• 申請號: 201910909576.2
• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110551607A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 張陽;夏柯;府偉靈
• 申請（專利權）人: 張陽
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12M1/34;C12M1/38;C12Q1/10;C12Q1/689;C12Q1/6844;C12R1/32
• 代理公司: 50230 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 陳炳萍

1.一種基用于核酸檢測的紙質微流體芯片，其特征在于，所述用于核酸檢測的紙質微流體芯片所涉及的核酸序列為：SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：28。

2.一種包含權利要求1所述用于核酸檢測的基于紙基微流控分析裝置，其特征在于，所述基于紙基微流控分析裝置即單個檢測條包括：樣品墊、膠體金結合墊、檢測線、控制線、NC膜、吸水墊、底板。

3.如權利要求2所述的基于紙基微流控分析裝置，其特征在于，所述樣品墊、膠體金結合墊、NC膜，吸水墊相互之間重疊2mm，整個寬4mm。

4.如權利要求2所述的基于紙基微流控分析裝置，其特征在于，所述樣品墊、膠體金結合墊、NC膜，吸水墊分別是聚酯纖維素膜或玻璃纖維素膜、玻璃纖維素膜、硝酸纖維素膜、吸水紙和具有粘性的PVC的底板。

5.一種基于RCA擴增反應的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法，其特征在于，所述基于RCA擴增反應的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法包括：檢測卡①：該檢測卡由6個檢測條組成，但只需要滴加一次檢測樣品，6種不同的納米金探針分別固定在6個膠體金結合墊上，其他位置固定的物質均相同；1號：多重檢測；指示在可檢測范圍內是否發生突變，但發生了哪種或哪幾種突變未知；2號：陰性對照；該結合墊上探針與所有的產物序列均不能互補結合，但能被控制線上互補序列捕獲；3號-6號：單堿基突變檢測，可驗證1號位置檢測結果，是否真的發生了突變，并指示發生了何種突變。

6.如權利要求5所述基于RCA擴增反應的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法，其特征在于，所述相關DNA序列：1-6號檢測條，膠體金結合墊上分別修飾SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：16、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15；所有控制線上均固定鏈霉親和素；檢測線上分別固定SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27。

7.一種基于RCA擴增反應的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法，其特征在于，所述基于RCA擴增反應的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法還包括：檢測卡②：多重檢測集中在一條檢測卡上，其中膠體金結合墊上修飾通用探針，捕獲檢測范圍內所有的擴增產物；檢測線有多個，每條線距離2mm，每條線指示一種點突變，該處固定的用于捕獲的物質與擴增反應引物有關，根據引物上修飾的物質不同在T線固定不同的捕獲物質即可實現多重耐藥突變位點的檢測，多余的納米金修飾的通用探針流向固定有互補堿基的控制線；檢測擴增反應液時，在C線有顏色變化的條件下，T線數目和位置的變化即可指示發生了多少和何種耐藥突變。

8.如權利要求7所述基于RCA擴增反應的結核分枝桿菌耐藥基因多重檢測方法，其特征在于，所述相關DNA序列：膠體金結合墊上修飾通用序列SEQ ID NO：11；T₁固定親和素，T₂固定地高辛，根據primer修飾的不同分別指示是否發生KatG315，inhA-15單堿基突變；C線固定SEQ ID NO：23。

9.一種如權利要求5或7任意一項所述基用于核酸檢測的紙質微流體芯片在結核分枝桿菌耐藥基因檢測中的應用。