[發(fā)明專利]用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針材料及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910897480.9
• 申請(qǐng)日: 2019-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110846027B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳瑩瑩;劉文霞;張斌斌;邢菲菲;馮凌燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號(hào): C09K11/06
• 分類號(hào): C09K11/06;C07D471/06;G01N21/64
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針，其特征在于該熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：其中，R1，R2，R3，R4為氫原子、氨基、甲基或乙基。本發(fā)明的熒光探針通過(guò)對(duì)聚多巴胺的吸附與解吸附發(fā)生熒光信號(hào)的變化來(lái)檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的活性。其優(yōu)點(diǎn)在于檢測(cè)限低、操作簡(jiǎn)單、成本低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針材料及其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中一種關(guān)鍵性酶。它具有羧肽酶和氨肽酶的活性，主要生理功能是水解乙酰膽堿(ATCh)，生成乙酸和膽堿(TCh)，終止神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)突觸后膜的興奮作用，保證神經(jīng)信號(hào)在生物體內(nèi)的正常傳遞。研究發(fā)現(xiàn)，如果體內(nèi)ATCh的含量低于正常水平，更容易罹患阿爾茨海默癥，而ATCh的含量可以通過(guò)影響AChE的活性來(lái)調(diào)控。同時(shí)，乙酰膽堿酯酶也參與細(xì)胞的發(fā)育與成熟，能促進(jìn)神經(jīng)元發(fā)育和神經(jīng)再生。因此，對(duì)AChE活性的檢測(cè)和研究有著十分重要的意義。

多巴胺(DA)是一種神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)，調(diào)控著中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多種生理功能。在有氧環(huán)境中，多巴胺很容易被氧化而自發(fā)聚合為聚多巴胺。聚多巴胺(PDA)是一種天然的黑色素，具有優(yōu)良的吸附性能，幾乎能吸附所有類型的底物。當(dāng)體系中存在抗氧化劑時(shí)，多巴胺不會(huì)聚合為聚多巴胺。

利用聚多巴胺優(yōu)異的吸附性能，我們將熒光染料分子吸附到PDA表面，由于聚集熒光發(fā)生淬滅。AChE能夠水解ATCh產(chǎn)生巰基，巰基分子作為一種抗氧化劑，可以防止DA聚合成PDA，熒光分子無(wú)法吸附聚集，體系中的熒光不會(huì)淬滅。基于此原理，我們構(gòu)建了一種熒光探針，用于快速、靈敏地檢測(cè)AChE的活性，此方法能夠有效實(shí)現(xiàn)對(duì)AChE的定量檢測(cè)，具有檢測(cè)限低、操作簡(jiǎn)單、成本低的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的之一在于提供一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針材料。

本發(fā)明的目的之二在于提供該探針材料的制備方法。

本發(fā)明的目的之三在于提供該探針材料，并利用聚多巴胺和該熒光探針聯(lián)用來(lái)檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的活性。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下反應(yīng)機(jī)理：

根據(jù)上述反應(yīng)機(jī)理，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針，其特征在于該熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R1，R2，R3，R4為氫原子、氨基、甲基或乙基。

一種制備上述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：將苝二酐和有機(jī)胺按照1:2～1:5的摩爾比溶解在N,N-二甲基甲酰胺DMF和1,4-二氧六環(huán)混合液中，在惰性氣氛保護(hù)下，加熱至100-180℃，反應(yīng)2～10小時(shí)，通過(guò)離心、提純后，得到目標(biāo)產(chǎn)物用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針；所述的苝二酐的結(jié)構(gòu)式為：

所述的有機(jī)胺為三甲胺、三乙胺、異丙胺、1,2-二甲基丙胺，甲酰胺、乙酰胺、三(2-氨乙基)胺或二乙醇胺。

上述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性的熒光探針材料在中的應(yīng)用。

本發(fā)明的熒光探針通過(guò)對(duì)聚多巴胺的吸附與解吸附發(fā)生熒光信號(hào)的變化來(lái)檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的活性。其優(yōu)點(diǎn)在于檢測(cè)限低、操作簡(jiǎn)單、成本低。

附圖說(shuō)明

圖1為按照實(shí)施例1得到的熒光探針與多巴胺的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化的熒光光譜圖；

圖2為按照實(shí)施例2得到的熒光探針對(duì)乙酰膽堿酯酶活性檢測(cè)的熒光光譜圖

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1