[發明專利]原位消解土壤大環內酯類抗生素污染的復合制劑及制備方法與應用

有效

• 申請號: 201910896768.4
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110592068B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 解開治;徐培智;顧文杰;盧鈺升;蔣瑞萍;李文英;李夏;孫麗麗;盧廷超
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院農業資源與環境研究所
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N1/20;C12N1/36;B09C1/10;C12R1/38;C12R1/40;C12R1/01;C12R1/125
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;裘暉

1.一種原位消解土壤大環內酯類抗生素污染的復合制劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）將營養載體、吸附載體和表面活性劑混合均勻，進行除菌處理，得到耦合載體；

（2）在除菌后的耦合載體中接入大環內酯類抗生素降解菌液、能量供給菌菌液和磁介質菌菌液，得到混合物I；發酵，得到原位消解土壤大環內酯類抗生素污染的復合制劑；

所述的營養載體的組成按質量百分比計，如下：氨基酸粉4～12%、糖蜜粉8～14%、蛋白胨5～9%、酵母提取物2～4%、骨粉4～8%、稻殼60～65%；

所述的吸附載體的組成按質量百分比計，如下：磁鐵礦粉8～16%、Fe₃O₄磁性納米顆粒12%、Fe₃O₄@SiO₂磁性納米復合粒子0～7%、麥飯石粉25～35%、硅藻土粉25～26%、生物碳15～25%；或如下：磁鐵礦粉8～16%、Fe₃O₄磁性納米顆粒0～12%、Fe₃O₄@SiO₂磁性納米復合粒子7%、麥飯石粉25～35%、硅藻土粉25～26%、生物碳15～25%；

所述的表面活性劑為聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、辛基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸與2-氨基乙醇的1:1型化合物、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、十二烷基硫酸鈉中的一種或至少兩種；

所述的混合物I中各成分的組成按質量百分比計，如下：菌體濃度為1.2×10¹²cfu/mL的大環內酯類抗生素降解菌菌液10～15％、菌體濃度為1×10¹²cfu/mL的能量供給菌菌液4～8％、菌體濃度為1×10¹²cfu/mL的磁介質菌菌液5～10％、營養載體49～65％、吸附載體10～20％、表面活性劑5～7％；

所述的大環內酯類抗生素降解菌選自以下任一組合：

1）洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）GB-01、洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）ATCC 17759、越南伯克霍爾德氏菌（Burkholderia vietnamiensis）TS1、越南伯克霍爾德氏菌（Burkholderia vietnamiensis）ATCC BAA-248、假單胞菌（Pseudomonas sp.）C3、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）Ery-E、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）CICC 10368、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putda）ACCC 10081、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）XP12、無丙二酸檸檬酸桿菌（Citrobacter amalonaticus）FY、蠟樣芽孢桿菌（Bacillaceae cereus）AVM1、蠟樣芽孢桿菌（Bacillaceae cereus）G10、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtlis）G1、蒼白桿菌（Ochrobactrum haematophilum）AW1-12、人蒼白桿菌（Ochrobactrum anthropi）CICC 20697；

2）洋蔥伯克霍爾德菌ATCC 17759、假單胞菌C3、惡臭假單胞菌CICC 10368、無丙二酸檸檬酸桿菌FY、人蒼白桿菌CICC 20697；

3）經紅霉素馴化后的假單胞菌C3、惡臭假單胞菌CICC 10368、無丙二酸檸檬酸桿菌FY、人蒼白桿菌CICC 20697；

4）經泰樂菌素馴化后的越南伯克霍爾德氏菌TS1、越南伯克霍爾德氏菌ATCC BAA-248、假單胞菌C3、惡臭假單胞菌Ery-E、惡臭假單胞菌XP12、無丙二酸檸檬酸桿菌FY、蠟樣芽孢桿菌G10、枯草芽孢桿菌G1、人蒼白桿菌CICC 20697；

5）經阿奇霉素馴化后的洋蔥伯克霍爾德菌ATCC 17759、越南伯克霍爾德氏菌TS1、惡臭假單胞菌ACCC 10081、蠟樣芽孢桿菌AVM1、蠟樣芽孢桿菌G10、枯草芽孢桿菌G1、蒼白桿菌AW1-12；

所述的能量供給菌為枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）ACCC 10628和產氨短桿菌（Brevibacterium ammoniagenes）ACCC 04259，或是枯草芽胞桿菌ACCC 10628、產氨短桿菌ACCC 04259和產氨短桿菌SCTCC 100664，或是枯草芽胞桿菌ACCC 10628、產氨短桿菌ACCC04259、產氨棒桿菌（Corynebacterium ammoniagenes） ACCC 10158、短小芽胞桿菌（Bacilluspumilus）ACCC10387和產氨短桿菌（Brevibacteriumammoniagenes）SCTCC100664，或是枯草芽胞桿菌ACCC 10628和產氨棒桿菌ACCC 10158，或是枯草芽胞桿菌ACCC10628、產氨棒桿菌ACCC 10158和產氨短桿菌SCTCC 100664；

所述的磁介質菌為副球菌（Paracoccus sphaerophysae）ACCC 05413和鞘氨醇單胞菌（Sphingomonas yabuuchiae）ACCC 19937，或是副球菌ACCC 05413、鞘氨醇單胞菌ACCC19937、熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）CICC 23919和洋蔥伯克霍爾德氏菌（Burkholderia cepacia）CICC 10828，或是鞘氨醇單胞菌ACCC 19937、熒光假單胞菌CICC23919和洋蔥伯克霍爾德氏菌CICC 10828，或是副球菌ACCC 05413、鞘氨醇單胞菌ACCC19937和熒光假單胞菌CICC 23919。