[發明專利]一種包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠

在審

• 申請號: 201910896530.1
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110623917A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 郭靜;晁曉東;王泊
• 申請（專利權）人: 西安東澳生物科技有限公司
• 主分類號: A61K9/06
• 分類號: A61K9/06;A61K47/36;A61K35/28;A61K31/728;A61P17/02;A61P17/00
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1.一種包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠，其特征在于，所述包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠由干細胞復合因子和透明質酸鈉組成；按照質量體積比透明質酸鈉的添加比例為干細胞復合因子溶液的0.1％～0.5％。

2.一種如權利要求1所述包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠的制備方法，其特征在于，所述包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠的制備方法包括以下步驟：

第一步，經過組織塊培養法獲得臍帶間充質干細胞，純化、擴大培養；收集細胞培養上清液，經過濃縮、過濾、蛋白含量測定、質檢，得到干細胞復合因子溶液；

第二步，然后將干細胞復合因子溶液和透明質酸鈉混合均勻，制備成包載干細胞復合因子的透明質酸鈉凝膠。

3.如權利要求2所述的包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠的制備方法，其特征在于，所述干細胞復合因子的制備方法包括：

步驟一，臍帶間充質干細胞的原代分離與培養；

步驟二，臍帶間充質干細胞表面標志物的鑒定；

步驟三，細胞因子生產與檢測。

4.如權利要求3所述的包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠的制備方法，其特征在于，所述步驟一具體包括：

1)將臍帶組織放置在含臍帶采集液的專用臍帶無菌采集瓶中，密封保存；使用4℃恒溫保溫箱，送回無菌實驗室；

2)在生物安全柜內，將臍帶倒入150mm直徑培養皿中，用生理鹽水清洗3-5次；用長柄手術剪將臍帶剪成長3-4cm的小段，用生理鹽水重復清洗3-5次，去除血漬；

3)使用眼科彎剪沿靜脈血管螺旋走勢剪開臍帶，將靜脈血管去除干凈，再使用帶齒彎鑷撕下兩條動脈，用眼科鑷將位于羊膜與血管之間的白色結締組織即華通氏膠取出；用生理鹽水沖洗華通氏膠，重復清洗2-3次；

4)將獲得的華通氏膠用眼科彎剪將膠體剪碎，剪成1mm³大小，接種于150mm直徑無菌培養皿中，組織塊兒間隔約2mm，組織貼好后將培養皿小心放入培養箱中30min，隨后取出，加入無血清間充質干細胞培養基，加入量鋪滿皿底即可；

5)組織貼壁后，第2天進行補液，以后每2～3d換液1次；

6)在倒置顯微鏡下觀察，細胞融合達到60％后，去除組織塊，用0.25％的胰酶消化，按1∶3～1∶4的比例傳代，繼續擴增培養。

5.如權利要求3所述的包載干細胞復合因子的美容及皮膚修復透明質酸鈉凝膠的制備方法，其特征在于，所述步驟具體包括：

1)取P5代以內細胞，胰酶消化計數后，按1×10⁵-1×10⁶/管的密度接種至7個1.5ml EP管中，每管加入1ml PBS，混勻細胞懸液，1000rpm/min，離心5min；離心完畢后，棄掉上清，每管加入100μl的PBS重懸細胞，并在避光條件下分別加入以下流式抗體5μl：PE Anti-HumanHLA-DR、PE anti-human CD105、FITC Anti-Human CD90、FITC anti-human CD34、FITCanti-human CD45、FITC Anti-Human 29；

2)抗體加入后用200μl微量移液器混勻，4℃避光孵育30min；

3)孵育結束后，用PBS洗滌細胞兩次，每次用1ml；1000rpm/min，離心5min；離心后用500μl PBS重懸細胞后上流式儀檢測。