[發明專利]一種兔血抗氧化肽的發酵制備方法

有效

• 申請號: 201910892800.1
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110564805B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 肖嵐;辛松林;董平;李燮昕;安攀宇
• 申請（專利權）人: 四川旅游學院
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P21/00;C12N1/20;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/25
• 代理公司: 北京遠創理想知識產權代理事務所(普通合伙) 11513
• 代理人: 張素妍

1.一種兔血抗氧化肽的發酵制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)、分別制備枯草芽孢桿菌種子培養液、凝結芽孢桿菌種子培養液和植物乳桿菌種子培養液；按體積比3:1:1的比例，將枯草芽孢桿菌種子培養液、凝結芽孢桿菌種子培養液和植物乳桿菌種子培養液混合，得到混合種子液；

(2)、以滅菌后的兔血作為培養底物，將混合種子液接種至培養底物中，接種量為4.5％；

(3)、對步驟(2)所得物，在37℃、135r/min轉速下，培養3.5天，然后對所得培養液進行離心、抽濾和超濾之后，即得抗氧化肽；

所述枯草芽孢桿菌為：SICC1.197.保藏于四川省微生物資源平臺菌種保藏中心；所述凝結芽孢桿菌為：CGMCCNo.6729，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心；所述植物乳桿菌為：CGMCCNo.5105，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心；

所述枯草芽孢桿菌種子培養液、凝結芽孢桿菌種子培養液和植物乳桿菌種子培養液的菌濃均為1×10⁹cfu/mL；

在進行所述超濾時，選用5KD的濾膜進行超濾。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌種子培養液是將活化好的枯草芽孢桿菌斜面菌種單菌落接種入滅菌后的種子液體培養基中，于35℃，轉速135r/min的恒溫振蕩培養箱中培養12h，所述種子液體培養基的配方為：葡萄糖10g/L、牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、氯化鈉5g/L，pH＝7.0。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述凝結芽孢桿菌種子培養液是將活化好的凝結芽孢桿菌斜面菌種單菌落接種入滅菌后的種子液體培養基中，于35℃，轉速135r/min的恒溫振蕩培養箱中培養12h，所述種子液體培養基的配方為：葡萄糖6g/L、牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸一氫鉀2g/L、七水硫酸錳1g/L，pH＝7.0。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述植物乳桿菌種子培養液是將活化好的植物乳桿菌斜面菌種單菌落接種入滅菌后的種子液體培養基中，于35℃，轉速135r/min的恒溫振蕩培養箱中培養12h，所述種子液體培養基的配方為：葡萄糖20g/L、牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸一氫鉀2g/L、七水硫酸錳0.25g/L、檸檬酸三鈉3g/L，pH＝7.0。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述兔血的濃度為6-14g/mL。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述兔血的濃度為10g/mL。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，進行離心時，用高速冷凍離心機進行離心，離心參數為：溫度為4℃、轉速為6000r/min、時間20min。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，進行抽濾時，利用0.45μm濾膜過濾；進行超濾時，利用5KD濾膜于離心機進行，離心參數為：溫度4℃，轉速4000r/min，時間10min。