[發明專利]檢測NPM1基因突變的引物、試劑盒和方法在審
| 申請號： | 201910892003.3 | 申請日： | 2019-09-20 |
| 公開（公告）號： | CN110564828A | 公開（公告）日： | 2019-12-13 |
| 發明（設計）人： | 林筱劍 | 申請（專利權）人： | 上海艾迪康醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知識產權代理有限公司 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 200237 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 核仁磷酸蛋白 檢測結果 快速檢測 位點突變 預后 可用 擴增 位點 突變 體內 參考 基因 檢測 治療 | ||
1.檢測NPM1基因突變的引物，其特征在于，NPM1基因突變位點是c.863-864位點，所述引物包括：擴增NPM1的c.863-864位點的擴增引物NPM1-F、NPM1-R和測序引物M13F、M13R，其堿基序列為：
NPM1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTGATGTCTATGAAGTGTTGTGG
NPM1-R:AACAGCTATGACCATGATTTATCAAACACGGTAGGGAA
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
2.檢測NPM1基因c.863-864位點突變的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)抽提外周血中的基因組DNA；
(2)利用擴增引物NPM1-F、NPM1-R對步驟(1)中提取的DNA進行擴增，獲得擴增產物；
NPM1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTGATGTCTATGAAGTGTTGTGG
NPM1-R:AACAGCTATGACCATGATTTATCAAACACGGTAGGGAA
(3)利用測序引物M13F、M13R對步驟(2)中的擴增產物進行測序；
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
(4)對測序結果進行判斷，通過判讀NPM1基因c.863-864位點的測序圖與參考序列是否相符來判斷NPM1基因是否發生突變。
3.檢測NPM1基因c.863-864位點突變情況的試劑盒，所述試劑盒包括檢測體系PCR擴增反應液、測序體系反應液，其特征在于，所述檢測體系PCR擴增反應液包括一對擴增引物NPM1-F、NPM1-R，所述測序體系反應液包括一對測序引物M13F、M13R，其序列為：
NPM1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTGATGTCTATGAAGTGTTGTGG
NPM1-R:AACAGCTATGACCATGATTTATCAAACACGGTAGGGAA
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測體系PCR擴增反應液還包括2×PCR Buffer、dNTPs和KOD FX DNA聚合酶。
5.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述測序體系反應液還包括EDTA、無水乙醇、75％乙醇、HIDI和Bigdye Terminator V3.1。
6.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述測序體系反應液還包括測序純化液，所述測序純化液包括核酸外切酶I和牛小腸堿性磷酸酶。
7.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品。
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