[發明專利]一種利用生物傳感器篩選精氨酸高產菌株的方法

有效

• 申請號: 201910891844.2
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110628793B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 徐美娟;陳佳敏;饒志明;劉平平;林月陽;江安;楊套偉;張顯
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/31;C12N15/65;C12N1/21;G01N30/02;G01N21/33;C12R1/15
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種利用生物傳感器篩選精氨酸高產菌株的方法，屬于生物技術領域。本發明提供了一種可用于篩選精氨酸高產菌株的生物傳感器，此生物傳感器含有編碼阻遏蛋白的基因argR、編碼啟動子的基因PargC以及標記基因sacB，使用此生物傳感器篩選精氨酸高產菌株具有操作簡單、檢測周期短、檢測效率高的優勢。

技術領域

本發明涉及一種利用生物傳感器篩選精氨酸高產菌株的方法，屬于生物技術領域。

背景技術

精氨酸是人體必需的一種氨基酸，存在于多種動物類食物中。有研究表明，精氨酸是生物體尿素循環的重要中間代謝產物，是肌體合成細胞漿蛋白和核蛋白的重要物質，還是天門冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、聚胺(腐胺、精胺)等轉換為高能磷酸化合物磷酸肌酸的中間體，具有獨特的生理和藥理作用，因此，其在食品、醫藥和化妝品等領域有十分廣泛的用途。

目前，工業上常通過微生物發酵法生產精氨酸，已被報道的精氨酸生產菌株則主要有鈍齒棒狀桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、大腸桿菌、釀酒酵母、黃色短桿菌等。雖然已被報道的部分精氨酸生產菌株已經具備了較為優良的發酵性能，但是，鑒于精氨酸重要的應用價值和巨大的市場需求，尋求發酵性能更為優良的精氨酸生產菌株仍然是所有研究開發工作的基礎，更是各精氨酸生產廠家增加自身市場競爭力的重中之重。

現有的篩選精氨酸高產菌株的方法主要是先對精氨酸生產菌株進行多輪隨機誘變，然后將誘變得到的菌株進行培養，最后通過坂口試劑法或高效液相色譜法測定每一個誘變菌株培養獲得的發酵上清液中精氨酸的含量，由于坂口試劑法或高效液相色譜法需要復雜的樣品處理，檢測周期也比較長，不能夠實現發酵液中精氨酸含量的快速檢測，這使得整個篩選過程勞動密集且耗時。因此，急需找到一種效率更高的篩選精氨酸高產菌株的方法以克服現有篩選方法的缺陷。

發明內容

[技術問題]

本發明要解決的技術問題是提供一種效率更高的篩選精氨酸高產菌株的方法。

[技術方案]

為解決本發明的技術問題，一種生物傳感器，所述生物傳感器是攜帶編碼阻遏蛋白的基因argR、編碼啟動子的基因PargC以及標記基因sacB的載體。

在本發明的一種實施方式中，所述載體為質粒pDXW-10。

在本發明的一種實施方式中，所述編碼阻遏蛋白的基因argR的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

在本發明的一種實施方式中，所述編碼啟動子的基因PargC的核苷酸序列如SEQID No.2所示。

在本發明的一種實施方式中，所述標記基因sacB的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

在本發明的一種實施方式中，所述標記基因sacB位于編碼啟動子的基因PargC的上游以及編碼阻遏蛋白的基因argR的下游。

在本發明的一種實施方式中，所述編碼阻遏蛋白的基因argR位于質粒pDXW-10自帶的編碼啟動子tac-M的基因的下游。

本發明還提供了一種重組菌株，所述重組菌株含有上述生物傳感器。

在本發明的一種實施方式中，所述重組菌株以精氨酸生產菌株為宿主。

本發明還提供了一種篩選精氨酸高產菌株的方法，所述方法為先將上述重組菌株接種至含有蔗糖的液體培養基中進行培養，得到培養液，然后檢測培養液中的OD₆₀₀值，OD₆₀₀值相對高的培養液所對應的誘變菌株即為精氨酸生產能力相對強的誘變菌株；或者，所述方法為先將上述重組菌株接種至含有蔗糖的固體培養基上進行培養至菌落長出，菌落相對大的誘變菌株即為精氨酸生產能力相對強的誘變菌株。