[發明專利]一種佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的培養基及方法

有效

• 申請號: 201910889600.0
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110551708B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 邱君志;嚴忠;陳慧;趙娟;薛青霖;謝勇嘯;楊芳;陳宇熹;睢珺文;李麗
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N9/58
• 分類號: C12N9/58;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明公開了一種佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的培養基及方法，培養基中的原料按重量分數計：木糖0.3?2.4 wt.%、胰蛋白胨0.2?1.6 wt.%、硫酸錳0.034?0.27 wt.%、維生素B₁ 0.0005?0.004 wt.%，初始pH值為7.4?8.6。發酵方法：將佩奇蟲殼菌接種于PDB液體培養基中制成種子液；取10 mL種子培養液接種于發酵生產蛋白酶的培養基中，于150 r/min、25℃條件下培養。本發明的發酵方法發酵周期短；條件溫和，易于控制；提供的用于佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的培養基，具有蛋白酶產率高，蛋白酶活力高等優點。

技術領域

本發明屬于真菌的發酵培養領域，具體涉及一種佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的培養基及方法。

背景技術

蛋白酶是通過分解肽鍵功能達到水解蛋白質的一類功能性酶。根據蛋白酶的作用模式和活性部位可將其分為8大類：天冬氨酸蛋白酶、天冬酰胺蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶、蘇氨酸蛋白酶及其他未知蛋白酶。

蛋白酶在真菌的生存和生命活動過程中具有重要作用，同時也是蟲生真菌侵染寄主的重要毒力因子之一。在不同的病原性真菌中，蛋白酶作用也不同。宿主的黏附、定植和播散以及逃避宿主的免疫應答過程中有蛋白酶參與其中。

佩奇蟲殼菌(Torrubiella petchii)屬于蟲草科(Cordycipitaceae)、蟲殼屬(Torrubiella)，其寄主為介殼蟲或粉虱。迄今，中國對于佩奇蟲殼菌的蛋白酶的功能性研究不多，我們采用佩奇蟲殼菌，可以拓寬產蛋白酶的菌株資源。因此研究佩奇蟲殼菌蛋白酶具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的培養基及方法，發酵周期短；條件溫和，易于控制；培養基具有蛋白酶產率高，蛋白酶活力高等優點。

本發明采取的技術方案如下：

一種佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的培養基，原料按重量分數計：木糖 0.3-2.4wt.%、胰蛋白胨 0.2-1.6 wt.%、硫酸錳 0.034-0.27 wt.%、維生素B₁ 0.0005-0.004 wt.%，初始 pH值為7.4-8.6。優選的，木糖6 g/L、胰蛋白胨16 g/L、硫酸錳2.7 g/L、維生素B₁0.01 g/L，初始 pH 值為7.8。

一種佩奇蟲殼菌發酵生產蛋白酶的方法：將佩奇蟲殼菌接種于PDB液體培養基中制成種子液；取10 mL種子培養液接種于發酵生產蛋白酶的培養基中，于150 r/min、25℃條件下培養。

本發明的有益效果在于：（1）方法：發酵周期短（只需要3天）；條件溫和，易于控制；（2）培養基：具有蛋白酶產率高（提前2天達到最高酶活），蛋白酶活力高等優點。

附圖說明

圖1是不同碳源對佩奇蟲殼菌蛋白酶活性的影響；

圖2是不同氮源對佩奇蟲殼菌產蛋白酶的影響；

圖3是不同金屬離子對佩奇蟲殼菌蛋白酶活性的影響；

圖4是不同pH對佩奇蟲殼菌蛋白酶活性的影響；

圖5是不同維生素對佩奇蟲殼菌蛋白酶活性的影響；

圖6是酪氨酸標準曲線。

具體實施方式

本發明用下列實施例來進一步說明本發明，但本發明的保護范圍并不限于下列實施例。

實施例1：單因素實驗確定培養基最優成分