[發明專利]一種骨髓間充質干細胞的增殖培養方法

在審

• 申請號: 201910881504.1
• 申請日: 2019-09-18
• 公開（公告）號: CN110468101A
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 張鵬成
• 申請（專利權）人: 安徽科門生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 34119 合肥市長遠專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 劉勇<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明公開了一種骨髓間充質干細胞的增殖培養方法，包括下述步驟：S1、分離提取骨髓細胞，接種后進行原代培養，待培養至細胞融合度達到80?90％時，用胰酶溶液消化，進行傳代培養；S2、待P3?P5代骨髓間充質干細胞培養至細胞融合度達到80?90％時，用胰酶溶液消化，接種至預鋪促貼壁材料的培養容器中，加入增殖培養基進行培養，即可。本發明的培養方法能大大提高骨髓間充質干細胞的擴增細胞數量、縮短培養周期，有效提高了骨髓間充質干細胞的增殖效率，適合應用于骨髓間充質干細胞的體外擴增。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種骨髓間充質干細胞的增殖培養方法

背景技術

骨髓間充質干細胞是在哺乳動物的骨髓基質中存在的以種具有分化形成骨、軟骨、脂肪、神經及成肌細胞的多種分化潛能的細胞。由于其具備多向分化潛能和自我更新能力，在體外可分化為成骨、軟骨和脂肪細胞等，可參與軟骨缺損修復、治療骨缺損或骨折、促進血管化構建等用途，在組織工程領域具備廣闊前景；同時，骨髓間充質干細胞還具有較容易獲取、低免疫排斥等優點，使其成為干細胞研究的熱點。但是，目前的骨髓間充質干細胞體外擴增方法普遍存在增殖效率低、獲取細胞數量少、培養周期長的缺陷，限制了骨髓間充質干細胞更廣泛的應用。

發明內容

基于背景技術存在的技術問題，本發明提出了一種骨髓間充質干細胞的增殖培養方法，有利于提高骨髓間充質干細胞的擴增細胞數量、縮短培養周期，從而提高骨髓間充質干細胞的增殖效率。

本發明提出的一種骨髓間充質干細胞的增殖培養方法，包括以下步驟：

S1、分離提取骨髓細胞，接種后進行原代培養，待培養至細胞融合度達到80-90％時，用胰酶溶液消化，進行傳代培養；

S2、待P3-P5代骨髓間充質干細胞培養至細胞融合度達到80-90％時，用胰酶溶液消化，接種至預鋪促貼壁材料的培養容器中，加入增殖培養基進行培養，即可；

所述增殖培養基包括下述成分：柚皮苷，姜黃素，維生素C，成纖維細胞生長因子，胰島素，胎牛血清，基礎培養基。

優選地，所述增殖培養基包括下述成分：柚皮苷3-6μg/mL，姜黃素1.2-2.4μg/mL，維生素C 20-30μg/mL，成纖維細胞生長因子5-10ng/mL，胰島素10-15μg/mL，胎牛血清10％，基礎培養基補足。

優選地，所述基礎培養基為α-MEM培養基或者DMEM/F12培養基。

優選地，所述促貼壁材料包括膠原蛋白和膠原三肽，優選地，所述膠原蛋白和膠原三肽的質量比為1：(0.01-0.1)；優選地，所述膠原三肽為棕櫚酰三肽-1或者棕櫚酰三肽-5。

優選地，所述促貼壁材料的預鋪處理方法為：將促貼壁材料溶于醋酸溶液中配制成質量濃度為0.5-1％的促貼壁材料溶液，然后鋪于培養容器上，干燥后即可；優選地，所述促貼壁材料溶液的用量為80-150μg/cm²。

優選地，所述步驟S1中，傳代培養的比例為1:3-1:4。

優選地，所述胰酶溶液的濃度為0.15-0.25％。

優選地，所述步驟S2中，培養的接種密度為1-2×10⁴個/mL。

優選地，所述步驟S2中，培養的具體條件為：5％CO₂,37℃。

本發明的有益效果如下：