[發明專利]一種用于肺癌早期篩查和診斷的聯合檢測血清標志物、試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201910879656.8
• 申請日: 2019-09-18
• 公開（公告）號: CN110579611B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 張建營;代麗萍;史健翔;王鵬;王曉;葉華;蔣迪
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 鄭州知一智業專利代理事務所(普通合伙) 41172
• 代理人: 劉彩霞

本發明涉及一種用于肺癌早期篩查和診斷的聯合檢測血清標志物、包含該聯合檢測血清標志物的試劑盒以及檢測方法，屬于生物醫學技術領域。本發明基于癌癥驅動基因在腫瘤發生和發展中所起的作用，定制138個癌癥驅動基因編碼的154個人源重組蛋白和本實驗室提供的26種人源重組蛋白的蛋白質芯片，共包含180個人源重組蛋白質，通過蛋白質芯片初步篩選出肺癌的早期檢測血清標志物，再經過ELISA實驗進行驗證，最終篩選出可用于肺癌早期篩查和診斷的一組肺癌聯合檢測血清標志物，其包括TP53、NPM1、GNA11、JAK2、TSC1和PIK3CA共6種基因編碼的蛋白，可輔助肺癌的臨床診斷，具有靈敏度高、特異性強、成本低等優點。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種用于肺癌早期篩查和診斷的聯合檢測血清標志物、包含該聯合檢測血清標志物的試劑盒以及檢測方法。。

背景技術

肺癌是中國以及全球發病率及死亡率第一的惡性腫瘤。在過去的40年間，肺癌的5年生存率僅從12％上升至16％，最主要原因是診斷時已屬晚期，相反，早期診斷的肺癌進行手術后生存率可提高到80％?？梢姡绨l現、早期診斷對肺癌的治療及預后具有重要的臨床意義。當前廣泛運用的檢測手段包括無創檢查(如X線、CT、鉬靶攝片等)和有創檢查(纖維支氣管鏡、支氣管造影、B超或CT定位下穿刺活檢等)，但缺乏依從性和普及運用的可能。找尋新的肺癌分子標志物，尤其是血清分子標志物，讓肺癌患者能夠及時有效的早查、早診、早治，是提高肺癌患者生存率、降低死亡率的關鍵科學問題。盡管目前有一些腫瘤標志物，如CA125(癌抗原125)、CA19-9(癌抗原19-9)、CEA(癌胚抗原)等可用于肺癌的輔助檢測，但敏感性和特異性均不高，所以到目前為止尚沒有理想的可供臨床使用的肺癌早期篩查和診斷的標志物。

近年來，在人類腫瘤學的研究領域內，許多研究已經發現癌癥患者血清中含有一組獨特的誘發自身抗體反應的細胞蛋白，被稱為腫瘤相關抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其誘導產生的抗體稱為抗TAA-抗體(autoantibody)。這一概念的提出對肺癌早期診斷研究指引了一個新的方向。腫瘤相關抗原(tumor-associate antigens，TAAs)的自身抗體在正常人和非腫瘤患者血清中不存在或滴度很低，而且患者血清中自身抗體水平的升高往往早于腫瘤癥狀的出現。再者，抗-TAA抗體具有其它腫瘤標志物不具備的優勢，一方面是它能夠在血清中持續穩定存在，而其它的標志物，包括TAA本身，在其被腫瘤細胞釋放后就被快速降解或者在其進入血液循環后的很短時間內就被機體清除。而且，檢測自身抗體的方法和試劑的普及性也有助于研究癌癥患者體內抗-TAA抗體的產生規律和功能。因此，檢測抗-TAAs的自身抗體可以作為早期腫瘤輔助篩查和診斷的血清標志物。目前各國學者已開展相關多項研究，值得一提的是EarlyCDT-Lung test的研究成果。EarlyCDT-Lungtest是首個通過檢測血清中自身抗體以檢測肺癌的工具，用以輔助內科醫生的物理檢查方法，從而提高肺癌診斷率。最初，該實驗包括六種TAAs自身抗體(p53、NY-ESO-1、CAGE、GBU4-5、Annexin I和SOX2)的檢測，檢測肺癌的靈敏度和特異度分別為40％和82％。新一版的EarlyCDT-Lung test將TAAs自身抗體更新至7種(p53、NY-ESO-1、CAGE、GBU4-5、SOX2、HuD和MAGE A4)，其靈敏度和特異度也分別提高到47％和90％。有研究顯示，這些自身抗體檢測結果陽性的非小細胞肺癌患者中超過一半(57％)為I期和II期的早期肺癌，提示EarlyCDT-Lung test可作為輔助CT早期檢測肺癌的生物學標志物檢查工具。這些研究成果提示腫瘤相關抗原抗體的檢測將有望成為肺癌早期檢測的重要血清學生物標志物。但值得注意的是，EarlyCDT-Lung test雖然具有較高的特異度和陽性預測值，但靈敏度仍然不夠理想(不到50％)，漏診的病例較多，導致大量患者未能被及時發現，而錯失手術治療的良機。鑒于目前自身抗體檢測在肺癌診斷的臨床應用中仍有不足，不斷地發現和鑒定新的肺癌相關TAAs仍是一項重要的工作。