[發(fā)明專利]薄殼山核桃炭疽病菌的padlock探針及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910879229.X
• 申請日: 2019-09-18
• 公開（公告）號: CN110760604B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設計）人: 趙玉強;田艷麗;朱燦燦;陳于;王敏
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6834;C12N15/11;C12R1/645
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本發(fā)明涉及檢測薄殼山核桃炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的padlock探針及其檢測方法，屬于生物技術領域。其特征在于，所述探針P?Ppl的序列為：P?Ppl:5’?TTGAGTCTTTGACTAGGACTCAGTTCTCCTCGACCGTTAGCAGCATGACCGAGATGTACCGCTATCGTacgtcgtattaggtagtcacATCCAGAACGTATG?3’。以此探針為基礎的薄殼山核桃炭疽病菌檢測試劑盒具較強的特異性和穩(wěn)定性，靈敏度最低為50個/ul孢子或100 pg/ul DNA，為薄殼山核桃炭疽病菌檢測提供了快速、靈敏、特異的技術方法。

技術領域

本發(fā)明涉及檢測薄殼山核桃炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides) 的padlock探針及其檢測方法，屬于生物技術領域。適用于口岸檢驗檢疫、農林業(yè)生產、植物保護等部門使用。

背景技術

薄殼山核桃（Carya illinoinensis ）也稱美國山核桃，為胡桃科山核桃屬落葉大喬木，學名長山核桃，喜光、喜溫暖濕潤氣候，適應性強，丘陵山區(qū)、沿海灘涂、低洼濕地均能生長，且果材兼用，是平原綠化的優(yōu)選樹種（彭方仁等，2012；巨云為等，2014；楊建華等，2007；田愛梅等，2002）。薄殼山核桃是世界上著名的干果之一，作為一種營養(yǎng)保健食品越來越受到大眾的喜愛。我國從20世紀初開始引種薄殼山核桃，目前主要分布在浙江、江蘇等地。

薄殼山核桃炭疽病主要為害果實、葉片、嫩枝、葉柄、 花序，病害一旦發(fā)生，果實產量可達10%-40%，嚴重影響薄殼山核桃果實的產量和品質。目前，該病害已在我國浙江，江蘇等地發(fā)生（戚錢錢等，2016）。薄殼山核桃炭疽病病原菌為膠孢炭疽菌 (Colletotrichum gloeosporioides)(巨云為等，2017)。目前關于膠孢炭疽菌的鑒定方法，主要通過病原菌的培養(yǎng)和形態(tài)特征及其 ITS 序列測序等方法判斷。傳統(tǒng)的病原菌檢疫檢測技術主要是以病原生物形態(tài)特征為主的傳統(tǒng)檢測方法。這種方法耗時較長而且效率非常低，通常需要將疑似攜帶病原菌的材料或發(fā)病植物組織進行分離培養(yǎng)，然后將純培養(yǎng)的病原生物回接到寄生植物上，進一步在室內通過形態(tài)學和生理學性狀進行病原鑒定，這種方法不但耗時較長，檢出率不高，此外鑒定時還受到其他因子的干擾，如專性寄生的病原菌無法培養(yǎng)，近似種依據形態(tài)與生物學特征難以鑒別等。因此傳統(tǒng)檢測方法無法滿足口岸檢疫、田間檢疫和健康種子生產的需要。