[發明專利]用于制備高密度脂蛋白膽固醇測定試紙的方法

有效

• 申請號: 201910876765.4
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN110554205B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 葉學松;梁波;自強
• 申請（專利權）人: 浙江大學山東工業技術研究院
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 杜放

用于測定高密度脂蛋白膽固醇的方法，包括以下操作：獲得10微升體液樣本，將體液樣本加入上述試紙的加樣區，等待反應，用熒光免疫分析儀測量試紙上的量子點線條的熒光強度，比對熒光強度?膽固醇濃度曲線獲得高密度脂蛋白膽固醇含量。本發明利用雙氧水淬滅量子點的方式來檢測高密度脂蛋白的含量，精度高，所需樣本量少的優點。

技術領域

本發明涉及高密度脂蛋白膽固醇測定方法，具體涉及一種用于高密度脂蛋白膽固醇測定的試紙條及其制備方法。

背景技術

POCT，即時檢驗（point-of-care testing），指在病人旁邊進行的臨床檢測及床邊檢測（bedside testing），通常不一定是臨床檢驗師來進行。是在采樣現場即刻進行分析，省去標本在實驗室檢驗時的復雜處理程序，快速得到檢驗結果的一類新方法。隨著人們生活水平的提高，人們的健康意識正在加強，POCT診斷設產品也越來越受到人們的青睞。由于POCT診斷產品具有體積小，操作簡單，不需要操作人員有較強的專業性便可得到準確的結果，這使得人們在家庭完成檢驗成為可能。

膽固醇可與血清中的脫輔蛋白質配合形成脂蛋白，脂蛋白分為乳糜微粒、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。從流行病學上看，HDL膽固醇的水平與動脈硬化性疾病發生頻率成反相關，其檢測廣泛用于預防或診斷缺血性心臟病。傳統的用于檢測HDL膽固醇的方法多首先使用離心或電泳將HDL分離，然后再進行后續操作，這些方法往往過程繁瑣，需要具有專業技能的人才能完成相關操作，因此這些方法不適用于家庭使用。

目前已經有相關專利報道了可對高密度脂蛋白膽固醇快速檢測的產品，例如專利（CN 1258601 C）公開了一種高密度脂蛋白（HDL）膽固醇測定用試件，方法使用兩種表面活性劑實現高密度脂蛋白（HDL）與非高密度脂蛋白的分離，所述試件結構簡單，檢測方便快捷。專利（US 7374719 B2）通過將經不同的試劑處理的功能層固定于設計好的試紙卡殼中實現了同時對總膽固醇，高密度脂蛋白膽固醇及甘油三酯的檢測，并通過計算，間接給出非高密度脂蛋白膽固醇的量，方法快捷方便，需要35 μL的樣本量。

盡管上述所報道的產品均適合用于家庭快速診斷，但由于以上產品均是基于顯色原理，例如專利（US 7374719 B2）通過光反射檢測生成產物的顏色變化，進而得知樣本中被測物的量。由于顯色本身需要反應層生成較多的產物以使顏色達到一定的深度變化才能被檢測，這使得這些產品進行檢測時需要較高的樣本量，同時，顯色本身涉及到酶反應，這增加了產品涉及的酶的種類及用量。再者，酶反應受樣本基質影響很大，因而上述產品面臨更大的“基質效應”，從而給檢測結果帶來更大的不確定性。

發明內容

針對上述情況，為克服現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種利用雙氧水淬滅量子點的方式來檢測高密度脂蛋白的檢測裝置。這種檢測裝置能夠分離出體液樣本中的高密度脂蛋白，使將分離出來的高密度脂蛋白進行氧化反應產生雙氧水，擴散到量子點線條，發生碳量子點熒光淬滅反應，碳量子點熒光淬滅反應表征高密度脂蛋白含量，從而實現高密度脂蛋白含量測試的目的。

本發明的第一方面，在于提供一種高密度脂蛋白膽固醇測定試紙，該試紙包括分離層，反應層和檢測層；分離層接受樣本并將高密度脂蛋白從樣本中分離，分離獲得的高密度脂蛋白滲透到反應層，反應層的產物包括雙氧水；雙氧水滲透到檢測層，檢測層包括擴散部和量子點線條，雙氧水先滲透到擴散部，再從擴散部擴散到量子點線條。

優選的，分離層在反應層之上，反應層在檢測層之上。樣本在重力的作用下逐層向下滲透。

優選的，在仰視方向，反應層完全覆蓋分離層；在俯視方向上，反應層部分覆蓋檢測層的擴散部，量子點線條位于未被反應層覆蓋的部分。反應層生成的雙氧水先滲透到擴散部，再從擴散部擴散到量子點線條。使量子點線條在反應層和分離層之外，便于量子點線條直接被觀測和檢驗。當然，量子點線條被覆蓋在反應層和分離層下方也可以，只要熒光免疫分析儀能夠檢測到量子點線條即可。