[發(fā)明專利]一種檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器的制備方法

有效

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• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN110702914B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 由天艷;畢曉雅;李麗波;劉曉紅;陳柏年
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N21/64;C09K11/02;C09K11/65
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1.一種檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于包含步驟如下：

（1）合成g-CNQDs；

將1.68 mmol檸檬酸三鈉和10.08 mmol尿素混合并在瑪瑙研缽中研磨成細(xì)粉；將粉末混合物倒入20 mL聚四氟乙烯襯里的高壓釜中并在180 ℃下加熱1 h后冷卻至室溫；將固體產(chǎn)物分散在30 mL水中并以10000 rpm離心10 min以除去不溶性雜質(zhì)；隨后，得到的上層溶液用100 Da的透析袋在二次水中透析24 h移除未反應(yīng)的前體；烘干稱重后溶于二次水中，并在4℃下儲(chǔ)存；平均粒徑為2.2 nm；

（2）g-CNQDs的羧基與OTA適配體修飾的氨基之間發(fā)生酰胺反應(yīng)合成g-CNQDs-apt：

按比例將步驟（1）制備的g-CNQDs和PBS溶液混合攪拌，在攪拌下緩慢加入OTA適配體溶液，并將混合物溶液連續(xù)攪拌一定時(shí)間后，制得g-CNQDs-apt，在一定溫度下儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>

g-CNQDs和PBS的體積比為2:1，混合攪拌的時(shí)間為15-30 min，其中，g-CNQDs濃度為4mg·mL^-1，PBS濃度為100 mM，其中，pH=7.4，含有10 mM EDC和5 mM NHS；

g-CNQDs與OTA適配體溶液的體積比為1:1；其中，OTA適配體溶液的濃度為1 μM；混合物溶液連續(xù)攪拌的時(shí)間為2-4 h；制得的g-CNQDs-apt儲(chǔ)存溫度為4℃；

（3）合成CoOOH納米片；

（4）混合g-CNQDs-apt與CoOOH納米片：

按比例將步驟（2）制備的g-CNQDs-apt和步驟（3）制備的CoOOH納米片溶液混合，用PBS溶液調(diào)節(jié)pH后作用一段時(shí)間，得到檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器；

g-CNQDs-apt溶液和CoOOH納米片溶液的體積比為3:2；用PBS溶液調(diào)節(jié)pH到7.4，作用時(shí)間為1-25 min；

所制得的檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器中，g-CNQDs-apt的最終濃度為0.05-0.25 mg?mL^-1，CoOOH納米片的最終濃度為5-30 μg?mL^-1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，CoOOH納米片的制備具體方法為：將125 μL 1.0 M的 NaOH溶液與500 μL10.0 mM 的CoCl₂·6H₂O溶液在微量離心管中混合，超聲處理1 min后加入25 μL 0.9 M 的NaClO溶液并繼續(xù)超聲10 min；隨后，以12000 rpm離心15 min收集CoOOH納米片，用二次水洗滌離心三次，并在干燥后重新分散于水中。

3.將權(quán)利要求1~2任一項(xiàng)所述制備方法制得的檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器用于檢測赭曲霉毒素A的用途。

4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于：檢測方法為：

S1：在900 μL檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器中加入100 μL 1-140 nM 的OTA標(biāo)準(zhǔn)溶液，反應(yīng)3-25 min后用熒光分光光度計(jì)在室溫下分別檢測溶液在469 nm處的熒光強(qiáng)度，得出熒光強(qiáng)度與OTA濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長設(shè)置為390 nm，激發(fā)狹縫寬度為3 nm，發(fā)射狹縫寬度為3 nm；

S2：在900 μL檢測赭曲霉毒素A的熒光生物傳感器中加入100 μL的待測溶液，反應(yīng)3-25min后用熒光分光光度計(jì)在室溫下分別檢測溶液在469 nm處的熒光強(qiáng)度，代入步驟S1中的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出待測溶液中赭曲霉毒素A的濃度。