[發明專利]一種采用HPLC-HG-AFS法測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法

在審

• 申請號: 201910864182.X
• 申請日: 2019-09-12
• 公開（公告）號: CN110702828A
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發明（設計）人: 海鑫;郭美華;周晉;高春璐
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/96;G01N30/74;G01N33/50
• 代理公司: 11139 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 馬鑫

本發明公開了一種采用HPLC?HG?AFS法測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法，屬于血液樣本檢測技術領域。為解決現有技術無法測定全血或紅細胞內結合砷具體濃度的不足，本發明提供了一種采用HPLC?HG?AFS法測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法，包括配制AsIII、AsV、DMAV和MMAV四種砷形態的標準溶液，確定HPLC?HG?AFS檢測條件并繪制四種砷形態的標準曲線，對血液樣本進行前處理并測定全血或紅細胞中四種砷形態的濃度。本發明采用雙氧水使細胞內蛋白結合砷解離，能夠明確血細胞內砷形態的代謝及分布特征。

技術領域

本發明涉及一種測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法，特別涉及一種采用HPLC-HG-AFS法測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法及其應用。本發明屬于血液樣本檢測技術領域。

背景技術

砷污染指由砷或其化合物所引起的環境污染，砷和含砷金屬的開采、冶煉，用砷或深化合物作原料的玻璃、顏料、原藥、紙張生產以及煤的燃燒等過程都可產生含砷廢水、廢氣和廢渣，對環境造成污染。大氣含砷污染除巖石風化、火山爆發等自然原因外，主要來自工業生產及含砷農藥的使用、煤的燃燒。含砷廢水、農藥及煙塵都會污染土壤，在土壤中累積病，進入農作物組織中；砷和砷化物通過水、大氣和食物等途徑進入人體，造成危害。

血液內砷濃度最能夠直接反映砷在人體內的代謝和分布特征，全血主要成分包含血漿、血清、紅細胞和白細胞。血液中藥物濃度的測定通常以血漿或血清作為樣本，但是已有研究證實大部分砷存在于紅細胞內，并且血漿和紅細胞中各砷形態所占比例不同。因此有必要測定紅細胞內砷濃度，從而清晰地闡明其在人體內的代謝特征和作用機制。

砷在體內以游離態和結合態形式存在，如何有效地提取血細胞內砷形態是方法準確測定的關鍵與難點。目前測定砷形態的技術手段主要有高效液相聯用電感耦合等離子體質譜(HPLC-ICP-MS)和高效液相色譜聯用氫化物發生原子熒光光譜(HPLC-HG-AFS)，二者的原理和靈敏度各不相同。已有報道利用HPLC-ICP-MS測定人血漿、尿液、腦脊液、唾液、頭發和指甲中的砷形態，其中Nguyen等公開報道應用HPLC-ICP-MS測定飲水砷暴露下人血清中As^III、DMA、MMA和As^V的方法，該方法采用三氯乙酸和乙腈對血清進行蛋白沉淀并利用陰離子色譜柱分離不同砷形態，該前處理方法不能用于血細胞內砷化物的提取，同時HPLC-ICP-MS儀器昂貴、運行成本高、操作復雜，不易普及。HPLC-HG-AFS采用我國自主研發的氫化物發生原子熒光分析技術，具有靈敏度高、元素干擾小，方法簡便快速并且易于操作等優點，已經成為食品衛生、飲用水中重金屬檢測的國家標準方法，在環境保護、水質分析、地質等領域有了很多應用，但是在生物樣本測定方面還應用較少。Guo等曾報道一種HPLC-HG-AFS法測定血漿中砷形態的方法，采用高氯酸處理血漿，利用陰離子色譜柱測定As^III、DMA^V、MMA^V和As^V，該方法不足之處也在于前處理手段無法完全提取血液中血細胞內的砷。為了解決現有方法存在的缺陷，同時擴大HPLC-HG-AFS法在生物樣本測定方面的應用，需要建立一種能夠快速、有效測定全血和紅細胞內砷形態的方法。

發明內容

為解決現有技術無法測定全血或紅細胞內結合砷具體濃度的不足，本發明提供了一種采用HPLC-HG-AFS法測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明的一種采用HPLC-HG-AFS法測定全血或紅細胞中四種砷形態濃度的方法，包括如下步驟：

步驟一、配制四種砷形態的標準溶液：