[發明專利]一種去除核糖體RNA的反轉錄引物池、試劑盒及去除核糖體RNA的方法在審
| 申請號： | 201910856986.5 | 申請日： | 2019-09-11 |
| 公開（公告）號： | CN111534513A | 公開（公告）日： | 2020-08-14 |
| 發明（設計）人： | 曹亮;吳勝標;喻志紅;蔣華;束文圣 | 申請（專利權）人： | 廣東美格基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市龍崗區吉華街道甘李*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 去除 核糖體 rna 轉錄 引物 試劑盒 方法 | ||
1.一種構建轉錄組測序文庫前，用于去除核糖體RNA的反轉錄引物池，其特征在于，該反轉錄引物池的序列如SEQ ID NO：1～8所示。
2.一種構建轉錄組測序文庫的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的去除核糖體RNA的反轉錄引物池。
3.根據權利要求2所述的構建轉錄組測序文庫的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還含有RNase H、DNaseI。
4.根據權利要求3所述的構建轉錄組測序文庫的試劑盒，其特征在于，所述反轉錄引物池中每條引物的濃度范圍為5μM～100μM。
5.一種構建轉錄組測序文庫時，用于去除核糖體RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)針對目的rRNA設計得到反轉錄的引物池；
(2)提取樣品的總RNA，加入引物池進行反轉錄，得cDNA-rRNA雜合鏈；
(3)加入RNase H消除cDNA-rRNA雜合鏈的rRNA，再加入DNase I消除cDNA-rRNA雜合鏈的cDNA；
(4)回收剩余的RNA產物。
6.根據權利要求5所述的構建轉錄組測序文庫時，用于去除核糖體RNA的方法，其特征在于，步驟(1)是在rRNA對應的基因組上以產物大小為500bp/條～5000bp/條的設計密度設計得到反轉錄的引物池。
7.根據權利要求5所述的構建轉錄組測序文庫時，用于去除核糖體RNA的方法，其特征在于，步驟(3)中RNase H的用量為3U～6U，DNase I的用量為2.5U～10U。
8.根據權利要求5所述的構建轉錄組測序文庫時，用于去除核糖體RNA的方法，其特征在于，步驟(2)樣品總RNA的起始量為1ng～5μg。
9.根據權利要求5所述的構建轉錄組測序文庫時，用于去除核糖體RNA的方法，其特征在于，步驟(2)樣品總RNA的完整度RIN值為2～10。
10.權利要求5至9任一項所述方法在構建轉錄組測序文庫中的應用。
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