[發明專利]包載基因藥物的靶向EpCAM脂質體納米顆粒及制備方法、應用

在審

• 申請號: 201910853380.6
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN110522724A
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 劉建文;梁欣;趙玉宇;高峰
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/18;A61K47/24;A61K47/28;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 31002 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 鄭暄;豆欣欣<國際申請>=<國際公布>=

本發明涉及一種具有EpCAM主動靶向功能的可包載基因藥物的脂質體納米顆粒的制備方法，包括步驟：(1)將DOTAP、HSPC、Chol、DSPE?PEG2000?COOH按預設配比共同溶于有機溶劑中；(2)減壓蒸發除去有機溶劑，得到透明均勻的脂質體膜；(3)使脂質體膜水化，并擠出成膜，形成空白脂質體納米顆粒；(4)將EDC、NHS加入所述的空白脂質體納米顆粒中，以活化所述的空白脂質體納米顆粒表面的羧基，將NH₂?修飾的EpCAM核酸適配體儲存液加入活化的空白脂質體納米顆粒中，孵育，以將所述的空白脂質體納米顆粒進行EpCAM核酸適配體修飾，而獲得所述的脂質體納米顆粒。

技術領域

本發明涉生物醫藥技術領域，具體涉及一種可包載基因類藥物的納米顆粒，其具有EpCAM靶向性。

背景技術

微小RNA(microRNA/miRNA/miR)代表了一類新的小型非編碼RNA，其通過與靶mRNA的3’非翻譯區(UTR)中的互補序列的堿基配對來轉錄后調控基因表達。功能研究表明miRNA幾乎控制著每個生物學過程，并且它們的異常表達導致疾病狀態，如癌癥。然而，與其他基因類藥物相同，miRNA模擬物的親水性質，對血清中核酸酶降解的敏感性，滲透性差和腫瘤細胞吸收減少是實現其有效的體內遞送的主要障礙。

脂質體是目前最成功的藥物輸送載體，美國食品和藥品管理局(FDA)已經批準約30多種脂質體系統進入臨床疾病的治療。脂質體載藥以前的機理主要也是通過腫瘤組織的EPR效應。為了實現更特異的靶向，核酸適配體功能化脂質體是更佳選擇。

上皮特異性黏附分子(EpCAM)是一種單次跨膜蛋白，于1979年由Herlyn等在結腸癌中發現，被認為是人類結腸癌組織的主要腫瘤相關抗原，可作為結腸癌靶向給藥的潛在靶點。

因此，通過構建靶向EpCAM的脂質體納米藥物傳遞系統包載miRNA等基因類藥物，可有效增加其在EpCAM高表達腫瘤部位的積蓄，提高其體內穩定性，以更好地發揮腫瘤治療效果。

發明內容

針對現有的醫藥技術缺陷和不足，本發明借助DSPE-PEG2000-COOH、DOTAP、HSPC以及Chol的組合和配比，將具有靶向功能的EpCAM核酸適配體修飾于脂質體納米顆粒上，實現了具有EpCAM靶向功能的、可載基因藥物的脂質體納米顆粒的制備。制備工藝簡單，可提高腫瘤治療效率，對基因藥物用于靶向治療EpCAM高表達的癌癥治療有重要意義。

本發明提供了一種具有EpCAM主動靶向功能的可包載基因藥物的脂質體納米顆粒，所述的脂質體納米顆粒包括組分DOTAP、HSPC、Chol合DSPE-PEG2000-COOH，且所述的脂質體納米顆粒的表面經EpCAM核酸適配體修飾。

本發明提供一種具有EpCAM主動靶向功能的可包載基因藥物的脂質體納米顆粒的制備方法，所述的靶向脂質體納米顆粒粒徑均勻，低毒性，具有長循環效果，能增動腫瘤靶向富集作用和提高腫瘤治療效果；所述的制備方法簡單、重復性高，對基因藥物的臨床應用有重要意義。

為實現本發明的目的，采用以下制備方法，其具體步驟如下：

(1)將DOTAP、HSPC、Chol、DSPE-PEG2000-COOH按預設配比共同溶于有機溶劑中；

(2)減壓蒸發除去有機溶劑，得到透明均勻的脂質體膜；

(3)使所述的脂質體膜水化，并擠出成膜，形成空白脂質體納米顆粒(NPs)；

(4)將EDC、NHS加入所述的空白脂質體納米顆粒中，以活化所述的空白脂質體納米顆粒表面的羧基，將NH₂-修飾的EpCAM核酸適配體儲存液加入活化的空白脂質體納米顆粒中，孵育，以將所述的空白脂質體納米顆粒進行EpCAM核酸適配體修飾，而獲得所述的具有EpCAM主動靶向功能的可包載基因藥物的脂質體納米顆粒(ANPs)。