[發明專利]一種從頭孢菌素C發酵液中分離純化脫乙酰氧基頭孢菌素C的方法

有效

• 申請號: 201910853175.X
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN110627816B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 張勇;陳倩倩;王珂;黃恩賢;李想;唐陽剛
• 申請（專利權）人: 麗珠集團新北江制藥股份有限公司
• 主分類號: C07D501/28
• 分類號: C07D501/28;C07D501/12
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛;任毅

本發明公開了一種從頭孢菌素C發酵液中分離純化脫乙酰氧基頭孢菌素C的方法。該方法包括以下步驟：1)取頭孢菌素C發酵液進行濃縮，得頭孢菌素C濃縮液；2)將頭孢菌素C濃縮液進行液相色譜制備柱分離，得脫乙酰氧基頭孢菌素C。本發明首次從頭孢菌素C發酵液中分離出DOCPC，并且本發明分離純化得到的DOCPC的純度在97％以上，這說明本發明能夠有效地從頭孢菌素C發酵液中分離純化得到高純度的DOCPC，這不僅為DOCPC的藥理研究提供了可靠的基礎，同時也為進一步得到高純度的DOCPC奠定了基礎，具有非常重要的現實意義。

技術領域

本發明涉及分離純化領域，尤其涉及一種從頭孢菌素C發酵液中分離純化脫乙酰氧基頭孢菌素C的方法。

背景技術

頭孢菌素屬β內酰胺類抗生素家族成員，目前占我國抗生素類藥物市場份額高達51％，青霉素約占17％。頭孢菌素C(CPC)生物合成類似于青霉素，為確定發酵終點、合理補料以便控制發酵過程，必須有效地檢測發酵過程中培養基成份、早期雜質及發酵產物與副產物比例。

頭孢菌素C發酵過程中包括有CPC、脫乙酰頭孢菌素C(DCPC)、脫乙酰氧基頭孢菌素C(DOCPC)等物質，脫乙酰氧基頭孢菌素C(DOCPC)是頭孢菌素C(CPC)發酵過程中的副產物，為頭孢菌素C的結構類似物。由于脫乙酰氧基頭孢菌素C可通過結構修飾轉化為某些重要的新型頭孢類藥物的中間體，引起人們的廣泛關注。

目前尚未有對DOCPC進行純化分離的相關報道，如何從頭孢菌素C發酵液中分離純化得到高純度的DOCPC具有一定難度且具有很重要的現實意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從頭孢菌素C發酵液中分離純化脫乙酰氧基頭孢菌素C的方法。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的目的之一在于提供一種從頭孢菌素C發酵液中分離純化脫乙酰氧基頭孢菌素C 的方法，包括如下步驟：

1)取頭孢菌素C發酵液進行濃縮，得頭孢菌素C濃縮液；

2)將頭孢菌素C濃縮液進行液相色譜制備柱分離，得脫乙酰氧基頭孢菌素C。

優選地，步驟1)濃縮至頭孢菌素C濃縮液的體積為頭孢菌素C發酵液體積的1/6～1/4。

優選地，步驟2)的液相色譜制備柱處理，包括如下步驟：

Ⅰ)將頭孢菌素C濃縮液進行第一次液相色譜制備柱處理，得溶液β；

Ⅱ)將溶液β進行第二次液相色譜制備柱處理，得脫乙酰氧基頭孢菌素C。

優選地，步驟Ⅰ)采用C18填料色譜制備柱進行處理；優選地，制備柱填料為PeaceODS。

優選地，步驟Ⅰ)利用流動相A為乙腈，流動相B為體積分數為0.1％的甲酸水溶液進行梯度洗脫。

優選地，步驟Ⅰ)梯度洗脫中洗脫時間和流動相的體積比為：0～60min 1％～12％流動相A。

優選地，步驟Ⅰ)上述色譜制備柱中的流速為10～12mL/min；更優選為10mL/min。

優選地，步驟Ⅰ)上述色譜制備柱中的柱溫為20～25℃。

優選地，步驟Ⅰ)中的檢測波長為254nm。

優選地，步驟Ⅱ)采用Sepax GP-C18或Welch Xtimate C18色譜制備柱進行處理。

優選地，步驟Ⅱ)利用流動相C為體積比為0.1：100的甲酸乙腈混合溶液，流動相D為體積分數為0.1％的甲酸水溶液進行梯度洗脫。

優選地，步驟Ⅱ)梯度洗脫中洗脫時間和流動相的體積比為：0～40min 3.5％流動相C。