[發(fā)明專利]一種玉米多堆柄銹菌的接種擴繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910852803.2
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN110551674B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬占鴻;黃莉群;張克瑜;李磊福;孫秋玉;王海光
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12N1/14;A01G7/06;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發(fā)明涉及植物病原菌的擴繁方法，具體涉及一種玉米多堆柄銹菌的接種擴繁方法。本發(fā)明提供一種玉米多堆柄銹菌的接種擴繁方法，包括：在病葉上噴施吐溫?20溶液，將病葉上的孢子洗脫于吐溫?20溶液中制備孢子懸浮液，接種到健康玉米苗上，經(jīng)培養(yǎng)后收獲擴繁得到的孢子，利用健康玉米苗進行重復(fù)轉(zhuǎn)接。該方法的多堆柄銹菌擴繁速度快，效率高，能夠快速獲得大量的高活力多堆柄銹菌孢子，大大縮短了多堆柄銹菌的擴繁周期，為研究玉米南方銹病提供了高效的菌種擴繁方法和技術(shù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物病原菌的擴繁方法，具體涉及一種玉米多堆柄銹菌的接種擴繁方法。

背景技術(shù)

玉米南方銹病是由多堆柄銹菌(Puccinia polysora Underw.)引起的一種氣傳病害，在多個地區(qū)均有發(fā)生。近年來，玉米南方銹病已成為影響玉米生產(chǎn)的主要病害之一，因此，人們對玉米多堆柄銹菌的研究和防治的重視逐漸增強。對于玉米多堆柄銹菌和玉米南方銹病的研究離不開人工接種，而人工接種則通常需要大量的高活性孢子。由于玉米多堆柄銹菌是專性寄生菌，只能在活的玉米植株上存活和繁殖，因此，對玉米多堆柄銹菌擴繁獲得大量孢子只能通過與玉米植株共培養(yǎng)的方法進行，使得玉米多堆柄銹菌的擴繁速度和孢子的大量來源受到限制。

中國專利201510765142.1公開了一種玉米多堆柄銹菌的單孢擴繁方法，其目的在于獲得玉米多堆柄銹菌的純菌系，但是該方法的擴繁效率仍不能滿足人工接種對于孢子的大量需求。因此，亟需開發(fā)一種具有較高擴繁效率、能夠快速得到大量玉米多堆柄銹菌孢子的接種擴繁方法。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種具有較高擴繁效率的玉米多堆柄銹菌的接種擴繁方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供一種玉米多堆柄銹菌的接種擴繁方法，其為：將病葉上的孢子洗脫并制備孢子懸浮液，接種到健康玉米苗上，經(jīng)培養(yǎng)后收獲擴繁得到的孢子，利用健康玉米苗進行重復(fù)轉(zhuǎn)接；其中，所述將病葉上的孢子洗脫包括：在病葉上噴施吐溫-20溶液后將病葉上的孢子洗脫于吐溫-20溶液。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在洗脫病葉上的孢子前，在病葉上噴施吐溫-20溶液能夠使孢子更好地黏著在葉片上，有效防止孢子脫落，減少孢子損失。

作為優(yōu)選，用于噴施的吐溫-20溶液的濃度為0.02～0.05％。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)采用上述濃度的吐溫-20溶液噴施病葉能夠使得水珠相互連接，在有效防止多堆柄銹菌的孢子脫落的同時更好地保持多堆柄銹菌孢子的活力。

作為優(yōu)選，所述吐溫-20溶液的噴施用量為1～2mL/病葉。

更優(yōu)選地，所述將病葉上的孢子洗脫制備孢子懸浮液具體為：在病葉上噴施吐溫-20溶液后，將病葉剪碎后加入吐溫-20溶液，浸泡病葉并震蕩，將病葉上的孢子洗脫于吐溫-20溶液，得到孢子懸浮液。

作為優(yōu)選，用于洗脫的吐溫-20溶液的濃度為0.02～0.05％。采用上述濃度范圍的吐溫-20溶液洗脫并制備孢子懸浮液能夠更好地提高孢子的接種成功率和擴繁效率。

更優(yōu)選地，所述用于噴施和洗脫的吐溫-20溶液的濃度為均為0.05％。

在進行孢子收獲時，傳統(tǒng)的針刮葉片收菌法會一定程度地?fù)p傷葉片，降低葉片的重復(fù)收菌次數(shù)，且針刮葉片收菌的孢子收獲效率較低。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，通過在開始產(chǎn)孢后的培養(yǎng)過程中采用震蕩玉米植株莖部使得孢子脫落的方法收獲孢子，結(jié)合在結(jié)束一輪擴繁培養(yǎng)時，采用吐溫-20溶液洗脫病葉上的孢子的方法，能夠顯著增加病葉的重復(fù)收菌次數(shù)，有效提高孢子收獲效率。利用上述方法，在培養(yǎng)過程中，每個病葉通過震蕩玉米植株的方法至少可重復(fù)收菌兩次，在結(jié)束培養(yǎng)時，最后再進行病葉上的孢子的洗脫，能夠有效地保證收獲的孢子量。