[發明專利]一種等張溶血素及其制備方法、處理生物樣本方法和檢測白細胞膜抗原方法

有效

• 申請號: 201910850740.7
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN110579595B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 俞秋興
• 申請（專利權）人: 核工業總醫院
• 主分類號: C12N1/06
• 分類號: C12N1/06
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

本等張溶血素，包括氧化溶解劑、助溶劑、細胞增溶劑、細胞固定劑、無機鹽及水質，氧化溶解劑為亞硝酸鈉，且含量為2?20g/L；助溶劑為甘油、二甘醇、丙二醇中的一種或多種，且含量為0.3?3mmol/L；細胞增溶劑為異丁醇、甲醇、乙醇中的一種或多種，且含量為0.1?1mol/L；細胞固定劑為多聚甲醛、甲醛、乙醇、丙酮的一種或多種，且含量為10?40g/L；無機鹽為氯化鈉、氯化鎂和氯化鈣，且所述氯化鈉的含量為1?10g/L，氯化鎂的含量為1?100mmol/L，氯化鈣的含量為1?100mmol/L。同時提出了該溶血素制備方法、溶血素處理生物樣本方法和通過流式細胞儀檢測白細胞膜抗原方法，該溶血素處理樣本后白細胞各群體分區明顯，不損傷白細胞膜蛋白，既保留原有的生物學活性，又能完全裂解紅細胞，結果準確、性能穩定。

技術領域

本發明免疫學細胞分析涉及領域，具體涉及一種等張溶血素及其制備方法、處理生物樣本方法和檢測白細胞膜抗原方法。

背景技術

血細胞分析對于開展科學研究，疾病的預防、診斷和治療有著重要的價值，從最初研究細胞的形態、大小、數量到最近的細胞表面的抗原成分。傳統的細胞免疫和非特異性免疫功能檢測技術不能從單細胞水平對靶細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構進行多參數，高靈敏度的分析，流式細胞儀可以快速測量、分選、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量，并可以根據預選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來，目前應用于免疫學、血液學、腫瘤學、細胞遺傳學、細胞生物學、生物化學等臨床醫學和基礎醫學研究領域，如細胞表面分子的淋巴細胞及其亞群分析、細胞內細胞因子分析、白血病免疫分型、腫瘤耐藥相關蛋白分析、自身免疫性疾病相關HLA抗原分析、移植免疫中的交叉配型、線粒體膜電位、細胞凋亡、細胞內鈣離子濃度、中性粒細胞功能分析等。

由于體內發揮免疫功能的多數為白細胞，而人類血液中含量最多的是紅細胞，為了減少對靶細胞分析影響，需要剔除血液中紅細胞的干擾作用，在進行紅細胞溶血時要避免破壞白細胞的結構和功能，保留白細胞表面的膜蛋白，因此，對溶血的要求非常著高，現有的流式細胞溶血素多為低滲溶血素，即低于滲透壓的溶液，等滲液溶血素是與滲透壓相等的溶液，以前認為紅細胞在等滲溶液中，能保持其正常形態(不皺縮、不溶血)，但有的分子還能夠自由通過細胞膜，使紅細胞溶血，它們都是利用細胞內外滲透壓差異而導致細胞膜破裂，通過改變紅細胞的物理結構實現溶血反應。一些化學物質如藥物、細菌毒素、蛇毒等，與紅細胞中的亞鐵血紅蛋白結合，變成高鐵血紅蛋白，使紅細胞結構發生改變，導致溶血反應。

溶血素的配方和儀器有一定的關系，不同的儀器使用不同的溶血素，同一溶血素在不同儀器上顯示的效果不一，主因是溶血素裂解后的白細胞形態有差異，再結合FSC/SSC的光路設計會導致淋巴、單核、粒細胞分群的差異。目前市面上許多溶血素只適合某一類流式細胞儀，不能達到一種溶血素通用多類流式細胞儀的作用。

因此，如何研發一種能夠克服上述缺陷的等張溶血素及其制備方法、處理生物樣本方法和檢測白細胞膜抗原方法，是本領域有關人員亟待解決的技術問題。

發明內容

為解決上述技術問題，我們提出了一種等張溶血素制備，本發明的溶血素能在紅細胞結構發生改變的同時又不破壞白細胞的形態、結構和功能，其檢測精確度高，干擾雜質少，能夠替代進口同類產品的溶血素，減少醫院醫療成本，減輕病人醫療費用。

為達到上述目的，本發明的技術方案如下：