[發明專利]一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法在審
| 申請號： | 201910831751.0 | 申請日： | 2019-09-04 |
| 公開（公告）號： | CN110441084A | 公開（公告）日： | 2019-11-12 |
| 發明（設計）人： | 趙亞;范鴻雁;馮學杰;胡福初;王祥和;郭利軍;羅志文;陳哲 | 申請（專利權）人： | 海南省農業科學院熱帶果樹研究所 |
| 主分類號： | G01N1/06 | 分類號： | G01N1/06;G01N1/42;G01N1/30 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 趙蕊紅 |
| 地址： | 571100 海*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 菠蘿蜜果肉 冰凍切片 蔗糖 速凍 冰晶 冷凍箱 磷酸緩沖液 細胞 果肉組織 實驗步驟 細胞結構 樣品組織 真空抽氣 組織結構 包埋劑 固定的 培養箱 切片圖 再利用 甘油 染色 包埋 回溫 浸洗 切片 液氮 破碎 清晰 優化 保證 | ||
1.一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)取新鮮的菠蘿蜜果肉切成小塊，并將小塊果肉組織置于含有濃度為18～23％的蔗糖的FAA固定液中處理25～35min，再將固定處理后的果肉組織用含有濃度為18～23％的蔗糖的磷酸緩沖液浸洗20～30min；
(2)將浸洗后的果肉組織置于甘油中，并真空抽氣40～60min；
(3)將真空抽氣后的果肉組織置于培養箱中培養，再利用蔗糖溶液和OTC的混合包埋劑進行包埋20～40min；
(4)將包埋好的果肉組織置于液氮中速凍35～45s；
(5)將速凍好的果肉組織置于冷凍箱中回溫0.8～1.2h，再進行切片；
(6)向切片材料滴加番紅水溶液染色，再將切片浸泡在蒸餾水中5～10s，洗滌材料2～3次，滴加180～220uL吐溫-20于切片材料表面，加蓋玻片。
2.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(1)中，磷酸緩沖液的濃度為8～12mmol/L。
3.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(2)中，將浸洗后的果肉組織置于濃度為10～20％的甘油中，并真空抽氣40～60min。
4.根據權利要求3所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(2)中，將浸洗后的果肉組織置于濃度為15％的甘油中，并真空抽氣50min。
5.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(3)中，培養溫度為20～25℃，培養時間為1～1.5h。
6.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(3)中，蔗糖溶液與OCT包埋劑按照體積比為0.8～1.2：0.8～1.2的比例進行混合。
7.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(4)中，速凍溫度為-190～-210℃。
8.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(5)中，切片溫度為-18～-21℃，切片厚度為7～12μm。
9.根據權利要求1所述的一種菠蘿蜜果肉的冰凍切片方法，其特征在于，所述步驟(6)中，向切片材料滴加0.5～1.5％番紅水溶液染色32～40min。
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