[發明專利]一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽及其制備方法

在審

• 申請號: 201910830042.0
• 申請日: 2019-09-04
• 公開（公告）號: CN110437309A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 張恒;羅永康;劉懷高;于海波
• 申請（專利權）人: 安徽國肽生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/14;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 合肥東信智谷知識產權代理事務所(普通合伙) 34143
• 代理人: 劉寒冰

1.一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽，其特征在于，所述藻蛋白肽的成分包括：氨基酸序列為HGERVVI、TPDVSIS、YPLIDVK的多肽，且所述多肽的含量為52～58％。

2.一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

Step1：制備節旋藻蛋白液；選用節旋藻粉溶解于符合飲用水衛生標準的水中，待其完全溶解，采用高速剪切機處理2-3min，得到節旋藻蛋白液；

Step2：蛋白變構；將step1中得到的節旋藻蛋白液用超聲波發生器經頻率為60-90kHz的超聲波處理20-30分鐘，再使用壓力為200～260Mpa的超高壓微射流處理1-3次，改變其節旋藻蛋白的組織結構，得到變構后的節旋藻蛋白液；

Step3：分步酶解；將step2中得到的節旋藻蛋白液中蛋白含量調節為7-10％，再依次加入復合蛋白酶和風味蛋白酶進行酶解，得到酶解液；

Step4：二次超濾；將step3得到的酶解液在95℃下保溫10分鐘，冷卻至室溫，往step3中的酶解液中加入酶解液0.1％重量的活性炭，再通過硅藻土進行分離，收集分離液；對得到的分離液使用二次超濾法進行過濾，分離得到分子量小于2000的蛋白肽；

Step5：多次洗脫；取step4中得到的分子量小于2000的蛋白肽，加入Sephadex G-15凝膠分離洗脫，再用RP-HPLC進行1次分離，收集分離后的肽溶液；

Step6：成分測定；將step5中得到的肽溶液通過濃縮、冷凍干燥，得到節旋藻蛋白肽粉；通過LC-MS/MS對蛋白肽的主要成分進行測定，確定其氨基酸序列為HGERVVI、TPDVSIS、YPLIDVK的肽的含量為52～58％。

3.根據權利要求2所述的一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，在所述step1中，節旋藻粉和溶劑水的質量比為5:1-8:1；節旋藻粉加入水中，在95-100℃條件下溶解并攪拌30-60min，再冷卻到65-75℃，放入高速剪切機中處理。

4.根據權利要求2所述的一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，在所述step2中，在超聲波處理之前，將step1中得到的節旋藻蛋白液調整到70-75℃；在超高壓微射流之前要經過20MPa的均質機預均質處理一次。

5.根據權利要求2所述的一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，在所述step3中，分步酶解按照節旋藻蛋白液中蛋白重量0.6～1.0％的重量百分比加入蛋白酶進行分步酶解，包括：第一步酶解，利用0.5～0.8％復合蛋白酶，在45～60℃條件下進行酶解反應1.0～2.5h。

6.根據權利要求5所述的一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述復合蛋白酶包括：堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，所述堿性蛋白酶、所述木瓜蛋白酶和所述中性蛋白酶的質量比為(1-2)：1：(1-2)。

7.根據權利要求5所述的一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，在step3中，所述分步酶解還包括：第二步酶解，往第一步酶解后的酶解液中添加0.1～0.2％風味蛋白酶，在50～60℃條件下進行酶解反應0.5～1.0h，得到最終的酶解液。

8.根據權利要求2所述的一種具有DPP-Ⅳ抑制功能的藻蛋白肽的制備方法，其特征在于，在所述step4中，所述二次超濾法的具體步驟為，利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾，先將分子量小于5000道爾頓的蛋白和多肽分離出來，再用孔徑為2000道爾頓的膜將分子量小于2000道爾頓的蛋白肽分離出來，得到分子量小于2000的蛋白肽。