[發明專利]一種培養基及其應用和誘導肌腱干細胞向脂肪細胞分化的方法

有效

• 申請號: 201910827034.0
• 申請日: 2019-09-03
• 公開（公告）號: CN110499282B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 陳東煌;陳海佳;葛嘯虎;王小燕;黃幸
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司;廣東國科細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及干細胞培養技術領域，尤其涉及一種培養基及其應用和誘導肌腱干細胞向脂肪細胞分化的方法。本發明將TGF?β1、EGF和G?CSF添加入基礎培養基，作為肌腱干細胞成脂肪分化的誘導培養液。提高了肌腱干細胞向脂肪細胞分化的數量并縮短分化的時間。實驗表明，以本發明提供的培養液誘導肌腱干細胞，能夠在21天內即出現脂肪細胞的特性，細胞形態發生改變且油紅O染色細胞數目增多。誘導28天后，細胞形態逐漸改變，呈多角形，細胞間質內含有礦鹽沉積的鈣化結節，油紅O染色呈陽性。

技術領域

本發明涉及干細胞培養技術領域，尤其涉及一種培養基及其應用和誘導肌腱干細胞向脂肪細胞分化的方法。

背景技術

肌腱病在高運動量的人群中常見，以局部疼痛、腫脹、功能障礙為臨床特征，常見發病部位為肩袖、崗上肌、髕腱及跟腱。目前肌腱病的發病機制尚未完全研究清楚，對肌腱病的治療方法有限，療效不明確，這與對該病病理機制缺乏深入了解有關。

2007年美國學者從人和兔的肌腱中分離出一種具有自我更新能力的細胞，將其命名為肌腱干細胞或祖細胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)。2010年香港學者從鼠肌腱中也分離出肌腱干細胞。該細胞具有多向分化潛能，并且在外源性前列腺素E2作用下異常分化。

目前，有學者提出肌腱干細胞的異常分化可能是肌腱病的發病基礎，但目前對肌腱干細胞的分化機制尚未研究清楚。為了了解慢性腱病組織病理學變化提供細胞生物學依據，也為慢性腱病的臨床治療提供新思路，應當進一步研究肌腱干細胞的分化機制，開發肌腱干細胞向脂肪細胞分化的方法。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種培養基及其應用和誘導肌腱干細胞向脂肪細胞分化的方法。

本發明提供的培養基包括基礎培養基、TGF-β1、EGF和G-CSF。

轉化生長因子-β(Transforming growth factor beta,TGF-β)是一多功能蛋白質，可以影響多種細胞的生長，分化、細胞凋亡及免疫調節等功能。轉化生長因子-β屬于轉化生長因子-β超家族蛋白。轉化生長因子-β可以結合到細胞表面的轉化生長因子-β受體結合而激活其受體。本發明中，所述TGF-β1的濃度100ng/ml～200ng/ml。一些具體實施例中，所述TGF-β1的濃度為100ng/ml或200ng/ml。

粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是一種糖蛋白，含有174個氨基酸，分子量約為20000。G-CSF主要作用于中性粒細胞系(lineage)造血細胞的增殖、分化和活化。重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用于造血祖細胞，促進其增殖和分化，其重要作用是刺激粒、單核巨噬細胞成熟，促進成熟細胞向外周血釋放，并能促進巨噬細胞及噬酸性細胞的多種功能。本發明中，所述G-CSF的濃度10ng/ml～20ng/ml。一些具體實施例中，所述G-CSF的濃度為10ng/ml或20ng/ml。

表皮細胞生長因子(EGF)，又名人寡肽-1，是人體內的一種活性物質，由53個氨基組成的活性多肽，藉由刺激表皮細胞生長因子受體之酪氨酸磷酸化，達到修補增生肌膚表層細胞，據說對受傷、受損之表皮肌膚擁有絕佳之療效。其最大特點是能夠促進細胞的增殖分化，從而以新生的細胞代替衰老和死亡的細胞。EGF還能止血，并具有加速皮膚和粘膜創傷愈合，消炎鎮痛，防止潰瘍的功效。EGF的穩定性能極好，在常溫下不易失散流動，能與人體內各種酶形成良好的協調效應。最初的EGF主要被運用于醫學領域，主要用于促進受損表皮的修復與再生，如治療燒傷、燙傷等。本發明中，所述EGF的濃度10ng/ml～20ng/ml。一些具體實施例中，所述EGF的濃度為10ng/ml或20ng/ml。

本發明中，所述基礎培養基為DMEM培養液。

一個具體實施例中，培養基包括：TGF-β1 100ng/ml、EGF 10ng/ml、G-CSF10ng/ml、DMEM培養基。