[發(fā)明專利]肌肉靶向的微環(huán)DNA基因治療

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910825998.1
• 申請(qǐng)日: 2019-09-03
• 公開（公告）號(hào): CN110684798A
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 諶平;謝亦武;陳志英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳新諾微環(huán)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/62;C12N15/57;C12N15/12;A61K48/00;A61K38/37;A61K38/48;A61P43/00;A61P7/04
• 代理公司: 11430 北京市誠輝律師事務(wù)所
• 代理人: 范盈

本申請(qǐng)涉及肌肉靶向的微環(huán)DNA基因治療。具體涉及一種用于在肌肉中長(zhǎng)期高效表達(dá)治療性基因產(chǎn)物的微環(huán)DNA載體。所述微環(huán)DNA載體配合肌肉靶向投遞技術(shù)，可以在肌肉中長(zhǎng)期高效表達(dá)治療性基因產(chǎn)物，從而克服蛋白類藥物半衰期有限、療效無法持續(xù)的缺陷。所述微環(huán)DNA載體可以用于治療常見的遺傳性基因缺陷病或慢性疾病，具有安全、有效、低成本的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種微環(huán)(Minicircle，MC)DNA載體，更具體為一種肌肉靶向的微環(huán)DNA基因治療。

背景技術(shù)

蛋白類藥物(包括激素、多肽)已廣泛應(yīng)用于多種單基因遺傳病(MonogenicDisorders)及慢性病的臨床治療。但是蛋白/激素/多肽藥物熱穩(wěn)定性不好，制備存儲(chǔ)不便；而且其體內(nèi)半衰期有限，需反復(fù)多次給藥。特別是對(duì)于遺傳性基因缺陷病和慢性病來說，往往需長(zhǎng)期甚至終生給藥，蛋白藥物使用更是不便、費(fèi)用難以承擔(dān)。基因治療可在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)目的基因產(chǎn)物，方便地實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期治療的目的。基因治療的實(shí)質(zhì)是將攜帶目的基因的基因載體投遞至機(jī)體靶器官/組織，目的基因進(jìn)入細(xì)胞后，利用宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)持續(xù)表達(dá)治療性基因產(chǎn)物。肌肉(骨骼肌)接近體表，是由終末分化的肌肉細(xì)胞組成，轉(zhuǎn)基因一但進(jìn)入即可持續(xù)存在，是理想的基因治療靶組織。

基因載體及相應(yīng)的基因投遞手段是基因治療的關(guān)鍵。基因載體包括病毒載體和非病毒載體兩大類。病毒載體可主動(dòng)進(jìn)入宿主細(xì)胞，轉(zhuǎn)染高效，是主流的基因載體，其中的代表是腺相關(guān)病毒(Adeno-associated Virus，AAV)載體。相反，以質(zhì)粒為代表的非病毒載體無法主動(dòng)進(jìn)入宿主細(xì)胞，體內(nèi)轉(zhuǎn)染有限。與本發(fā)明最類似的方案是基于AAV載體或基于質(zhì)粒載體的基因治療。AAV載體為代表的病毒載體其病毒外殼免疫原性強(qiáng)，容易引起劇烈的免疫反應(yīng)，安全風(fēng)險(xiǎn)高。此外，基因隨機(jī)整合導(dǎo)致的致癌和致畸風(fēng)險(xiǎn)也不容忽視。AAV載體基因容量有限，總包裝容量是4.7kb，除去固有的ITR序列和啟動(dòng)子、polyA等調(diào)控序列，目的基因長(zhǎng)度一般不能超過3.5kb。當(dāng)目的基因較大時(shí)，AAV載體無法包裝。而質(zhì)粒載體的最大缺陷是體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率低，表達(dá)難以持續(xù)。

對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，微環(huán)(Minicircle，MC)DNA無免疫原性，無基因整合風(fēng)險(xiǎn)，不受目的基因大小限制，克服了質(zhì)粒不能持續(xù)表達(dá)的缺陷，配合肌肉靶向投遞技術(shù)，可以在肌肉中長(zhǎng)期高效表達(dá)治療性基因產(chǎn)物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及微環(huán)(Minicircle，MC)DNA載體，以及肌肉靶向的微環(huán)DNA基因治療。

本發(fā)明提供了一種表達(dá)治療性基因產(chǎn)物的重組基因載體，其中，所述重組基因載體包含所述基因產(chǎn)物的編碼基因或目的基因。

在一個(gè)方面中，所述基因產(chǎn)物選自蛋白質(zhì)，多肽或核酸片段。優(yōu)選的，所述蛋白質(zhì)或多肽選自抗體、功能性蛋白、細(xì)胞因子、酶或激素，或者所述核酸片段選自基因片段，mRNA，siRNA，shRNA或miRNA。

在一個(gè)方面中，所述重組基因載體選自非病毒載體或病毒載體。優(yōu)選的，所述非病毒載體選自標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒或其它環(huán)狀表達(dá)盒子，或者所述病毒載體選自逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，慢病毒載體，腺病毒載體和腺相關(guān)病毒(Adeno-associated Virus，AAV)載體。

在一個(gè)方面中，所述功能性蛋白選自凝血因子IX(FIX)、凝血因子VIII(FVIII)或它們的變異體。優(yōu)選的，F(xiàn)IX選自全長(zhǎng)的、FIX-Padua突變體或FIX-KLW突變體。優(yōu)選的，F(xiàn)VIII選自全長(zhǎng)的、B區(qū)缺失型(B-domain deleted)凝血因子VIII(BDD-FVIII)突變體或BDD-FVIII-FD突變體。所述非病毒載體選自微環(huán)DNA載體，或者所述病毒載體選自腺相關(guān)病毒載體。