[發明專利]一種基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910824914.2
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN112516109A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 高原;陳繼源
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K47/20;A61K47/18;A61K47/42;A61K47/34;A61K47/04;A61K31/337;A61P35/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒，其特征在于，所述的仿生納米粒為載藥納米粒（簡稱TB@NP），由一層融合細胞膜包覆，融合膜由間充質干細胞膜和癌細胞膜組成，制成可靶向腫瘤及腫瘤骨轉移部位的仿生納米遞藥系統。

2.按權利要求1所述的基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒，其特征在于，所述的間充質干細胞提取自小鼠或大鼠的骨髓、胚胎或臍帶，采用淋巴分離液、貼壁分離法、紅細胞裂解法、流式分選法、免疫磁珠法及percoll分層液密度梯度離心分離純化制得。

3.按權利要求1所述的基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒，其特征在于，所述的融合的癌細胞膜來源于任一種具有骨轉移潛能的癌癥，所述癌癥選自前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，腎癌，肺癌，肝癌，宮頸癌或直腸癌。

4.按權利要求1-3任一所述的基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒，其特征在于，所述的間充質干細胞膜和癌細胞膜通過下述方法制備：培養的間充質干細胞和癌細胞通過細胞刮收集，重懸于4℃預冷的pH7.4的TM緩沖液中，經擠出器擠出，超聲后，離心去除細胞內容物，收集上清繼續離心，得沉淀，用TM緩沖液洗并重懸，再離心，得細胞膜沉淀，-80℃冰箱備用。

5.按權利要求1所述的基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒，其特征在于，所述的納米粒作為內核，其為無機納米粒或有機納米粒，選自硫辛酸納米粒（LA-NP）或硫辛酸-細胞內化肽6聚合物（LACLss）或硫辛酸交聯硫辛酸-細胞內化肽6納米粒（LC）或硬脂酰多肽聚合物（SHRss）或聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）納米粒或二氧化硅、介孔二氧化硅納米粒（MSN）或黑磷（P）或石墨烯量子點聚合物（GODss）或肽修飾的多壁碳納米管（MHR）的任意一種。

6.按權利要求5所述的基于間充質干細胞的融合癌細胞膜仿生納米粒的制備方法，其特征在于，其包括步驟：

（1）制備硫辛酸納米粒LA-NP：硫辛酸（LA）與半胱氨酸（Cys）溶于甲醇，室溫攪拌交聯，氮氣吹干甲醇，加二氯甲烷溶解，同時加入1%的膽酸鈉溶液，超聲乳化，加入雙蒸水，攪拌離心后，用W超濾管離心，得到純化的LA-NP；

（2）制備LACLss膠束：利用固相合成法合成LACL多肽,LACL與過量的半胱氨酸于甲醇中攪拌交聯，氮氣吹干甲醇，LACLss溶于雙蒸水中，自組裝形成LACLss膠束；

（3）制備LC納米粒：將LA-NP與LACLss混合，共孵育自組裝得LC納米粒；

（4）制備硬脂酰多肽聚合物SHRss：利用固相合成法合成硬脂酰多肽；所述SHR用雙蒸水配置成溶液，加入L-半胱氨酸鹽酸鹽，調節pH為7.0，攪拌下滴入過氧化氫，室溫避光反應并利用透析袋在蒸餾水中透析，收集凍干得SHRss；

（5）制備PLGA納米粒：利用超聲乳化法制備PLGA納米粒， PLGA溶于二氯甲烷中，加入到PVA 124溶液中，超聲乳化，室溫攪拌過夜，離心，收集PLGA納米粒沉淀，雙蒸水重懸即得PLGA納米粒；

（6）二氧化硅和單分散介孔二氧化硅納米球-星型MSN，溶于雙蒸水即得二氧化硅納米粒溶液和MSN納米粒溶液；

（7）制備黑磷（P）納米粒P-NP：取黑磷粉末溶于雙蒸水中，超聲，即得P-NP溶液；

（8）制備石墨烯量子點聚合物（GODss）：胺基封端的石墨烯量子點（GOD）溶液與還原敏感氨基交聯劑3’,3’-二硫代雙（磺酸琥珀酰亞胺基丙酸酯）（DTSSP）混合，交聯攪拌過夜，并用透析袋在蒸餾水中透析后，收集凍干得GODss；

（9）制備肽修飾的多壁碳納米管（MHR）：H3R6多肽由固相合成法合成；取多壁碳納米管（MWCNTs），同時加入68% 的硝酸，攪拌回流，冷卻至室溫后以蒸餾水稀釋抽濾烘干；稱取純化的MWCNTs投入濃硫酸/濃硝酸混酸中，水浴鍋中反應，離心去除反應液，凍干得羧基化的MWCNT-COOH；稱取MWCNT-COOH至含1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-NPs羥基丁二酰亞胺（NHS）的雙蒸水中，室溫攪拌，按MCWNT-COOH與H3R6質量比為1:30投料，室溫攪拌，離心1去除反應液，凍干得MHR。