[發明專利]一種用于病原體核酸檢測的微流控芯片及檢測方法

有效

• 申請號: 201910823764.3
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN110656037B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 吳國君;張洪濤;馮雯;鄭銳;張國豪
• 申請（專利權）人: 北京百康芯生物科技有限公司;百康芯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/6895;C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/68;C12R1/22;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市添源創鑫知識產權代理有限公司 44855
• 代理人: 姜書新

本發明提供了一種用于病原體核酸檢測的微流控芯片及檢測方法，所述微流控芯片包括芯片反應池，所述芯片反應池內包被固定有能擴增靶基因特異堿基序列的引物組，所述引物組包含一種病原體的兩個或兩個以上基因位點、或兩個或兩個以上病原體的兩個或兩個以上基因位點檢測用引物組，所述引物組的引物與待檢測病原體的靶基因核苷酸序列的一部分或其互補鏈互補。采用本發明的技術方案，可檢出的病原體具有靈敏度高、特異性強、方便快捷、適用范圍廣等優點，同時，還有試劑消耗量小，污染小等優點，該實驗全程為閉蓋式反應，減少了污染的可能性，成本低、且便攜。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，尤其涉及一種用于病原體核酸檢測的微流控芯片及檢測方法。

背景技術

引起人類感染性疾病的病原微生物有病毒、螺旋體、細菌、真菌、立克次體、衣原體、支原體和寄生菌，以病毒和細菌最為常見。病癥包括血流感染、呼吸道感染、細菌性腦膜炎及腦膿腫等。對于感染性疾病，臨床常規的血液等生化指標分析僅能通過免疫細胞及球蛋白水平初步判斷病因，無法確定病原菌的種屬。臨床上感染性疾病非典型性和混合感染的趨勢逐漸增加，很難通過病原鑒定以外的方法進行診治。

目前臨床上對病原菌鑒定的方法主要是培養法。其主要步驟取樣、培養、鑒定。培養法本身存在較多缺陷，不能滿足臨床需要。首先培養法檢測耗時長，培養時間與所感染的細菌種類有關，至少用時2-3天，真菌更長，當臨床出現急性病癥時，培養法無法適用；其次該方法準確性低，尤其是批量鑒定時，樣品之間很容易互相感染；再次受國內實驗室安全防護條件的限制，實驗室工作人員在分離培養病原菌時存在著高風險被感染的可能；最后培養法對實驗條件要求較高，需要的培養基種類較多，鄉鎮醫院、社區醫療單位和戶外等均無法使用細菌培養的檢測方法，很容易對病人造成貽誤。

對于普通PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈式反應）技術鑒定病原微生物的方法，因其檢測基因位點單一，而病原菌的基因有多態性和可變異性，在檢測準確性方面有一定的弊端。

發明內容

針對以上技術問題，本發明公開了一種用于病原體核酸檢測的微流控芯片及檢測方法，同時檢測一種病原體的多個基因或多個病原體的多個基因，檢測迅速。

對此，本發明采用的技術方案為：

一種用于病原體核酸檢測的微流控芯片，其包括芯片反應池，所述芯片反應池內包被固定有能擴增靶基因特異堿基序列的引物組，所述引物組包含一種病原體的兩個或兩個以上基因位點、或兩個或兩個以上病原體的兩個或兩個以上基因位點檢測用引物組，所述引物組的引物與待檢測病原體的靶基因核苷酸序列的一部分或其互補鏈互補。

采用本發明的技術方案，基因位點的檢測通過包被固定在芯片反應池中的引物組來實現，本發明的技術方案結合了核酸擴增技術和微流控芯片技術，同時檢測一種病原體的多個基因或多個病原體的多個基因，通過病原體的多個基因的檢測，從而減小誤檢，特異性好，靈敏度高，操作簡單，檢測迅速。

作為本發明的進一步改進，所述微流控芯片內設有對照組，所述微流控芯片包括進樣孔、反應孔和出氣孔。

作為本發明的進一步改進，所述對照組包括擴增對照、空白對照和提取對照組成的陣列。引物探針與目標檢測病原體無關的DNA片段模板同時固定在芯片反應池內，可以質控擴增反應體系。提取對照固定的引物探針可擴增樣本中與目標檢測病原體無關的DNA片段模板可質控樣本提取質量。

作為本發明的進一步改進，所述病原體為細菌、真菌、病毒、支原體或衣原體等任何病原微生物。

作為本發明的進一步改進，所述病原體為煙曲霉，所述煙曲霉的基因位點包括cytb基因位點、ITS基因位點、beta-tubulin基因位點；所述引物組包括cytb基因位點引物組、ITS基因位點引物組、beta-tubulin基因位點引物組；