[發明專利]一種植物乳桿菌生產透明質酸酶發酵優化工藝

有效

• 申請號: 201910822762.2
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN110408607B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 高瑞;韓鵬;韓秀云;齊寧;牛貴清;張彬;趙艷輝;郭弘彥;梁貴彬;王娜;劉文彬
• 申請（專利權）人: 山東安華生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12N1/20;C12R1/25
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 于曉曉

1.一種植物乳桿菌生產透明質酸酶發酵優化工藝，其特征在于，所述植物乳桿菌為植物乳桿菌CnT012-56，該菌株的分類命名為植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏時間為2018年11月28日，保藏編號為CGMCC NO.16836；

工藝包括以下步驟：

S1：配制種子培養基，所述種子培養基包括誘導劑、氮源、無機鹽和表面活性劑，

所述誘導劑同時可作為碳源利用，為5g/L分子量1000kDa-2000kDa的透明質酸，

所述氮源為復合氮源，包括5g/L蛋白胨、10g/L酵母粉、1.5g/L硫酸銨，

所述無機鹽包括0.1g/L氯化鈉、0.1g/L硫酸亞鐵、0.03g/L硫酸錳、0.04g/L氯化鈣、0.25g/L硫酸鎂，

所述表面活性劑為1mL/L吐溫-80或0.05g/L乙二胺四乙酸二鈉；

S2：向種子培養基中接入植物乳桿菌，培養獲得液體發酵菌種，菌種培養條件為pH6.0、轉速50rpm、培養溫度35℃、培養時間18-24h；

S3：配制液體發酵培養基，所述液體發酵培養基包括誘導劑、氮源、無機鹽和表面活性劑，

所述誘導劑同時作為碳源利用，為5-8g/L分子量500KDa-1300kDa的透明質酸，

所述氮源為復合氮源，包括5g/L蛋白胨、10g/L酵母粉、2g/L硫酸銨，

所述無機鹽包括0.1g/L氯化鈉、0.1g/L硫酸亞鐵、0.02g/L硫酸錳、0.05g/L氯化鈣、0.2g/L硫酸鎂、0.4g/L磷酸二氫鉀，

所述表面活性劑為1mL/L吐溫-80或0.05g/L乙二胺四乙酸二鈉；

S4：將液體發酵菌種接入液體發酵培養基中，接種量為5%，培養后結束發酵，菌種培養條件為pH5.5、培養溫度35℃、培養48h，對轉速及通氣量進行分階段調節：

0-20h，轉速50rpm、通氣量2L/min，

20-30h，轉速100rpm、通氣量4L/min

30-48h，轉速200rpm、通氣量8L/min；

S5：將發酵液離心后，收集上清液，即為粗酶液。

2.如權利要求1所述的一種植物乳桿菌生產透明質酸酶發酵優化工藝，其特征在于，所述S1中，采用500mL三角瓶裝200mL種子培養基。

3.如權利要求1所述的一種植物乳桿菌生產透明質酸酶發酵優化工藝，其特征在于，所述S3中，采用5L發酵罐裝4L液體發酵培養基。