[發明專利]石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器制備及使用方法

在審

• 申請號: 201910822251.0
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN110501502A
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 趙健偉;程娜;孫志
• 申請（專利權）人: 嘉興學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 32204 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)
• 代理人: 柏尚春<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明公開了石墨化碳?殼聚糖CA125免疫傳感器制備及使用方法，制備方法包括以下步驟：(1)制備石墨化碳；(2)電極預處理；(3)制備石墨化碳?殼聚糖復合溶液；(4)制備石墨化碳?殼聚糖修飾電極；(5)制備石墨化碳?殼聚糖CA125免疫傳感器。使用方法包括以下步驟：(1)對石墨化碳?殼聚糖CA125免疫傳感器進行電化學行為測試，得出石墨化碳?殼聚糖CA125免疫傳感器對CA125的擬合線性回歸方程及檢出限；(2)將待測濃度的樣品涂到石墨化碳?殼聚糖CA125免疫傳感器上，利用三電極體系進行檢測，并計算CA125抗原的濃度。該石墨化碳?殼聚糖CA125免疫傳感器制備步驟簡單、成本低廉，檢測CA125含量時靈敏度高、抗干擾性強、使用方便、檢測時間短。

技術領域

本發明涉及CA125免疫傳感器制備及使用方法，更具體地，涉及石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器制備及使用方法。

背景技術

CA125是一種用于檢測上皮卵巢癌細胞的特異性和關鍵腫瘤標志物之一。最近幾年來，電流型無標記免疫分析方法因其無標記免疫分析的高靈敏度引起了越來越多的研究興趣，該分析方法基于抗原抗體的特異性結合，在電極表面形成的免疫復合物阻礙電化學活性探針與電極之間的電子傳輸，從而引起電活性物質峰電流下降，利用這種電流的變化可實現定量檢測。目前無標記電化學傳感一般利用傳統電化學探針進行檢測，但傳統電化學探針檢測靈敏度不高，未能充分發揮電流型無標記免疫分析方法高靈敏度的優勢。

發明內容

發明目的：本發明的目的是提供一種操作簡單、成本低、靈敏度高的石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器的制備方法，本發明的另一目的是提供該免疫傳感器的使用方法。

技術方案：本發明所述石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器制備方法，包括以下步驟：

(1)石墨化碳的制備：利用苯胺、植酸以及引發劑制備獲得聚苯胺凝膠，并進行碳化得到石墨化碳；

(2)電極預處理；

(3)制備石墨化碳-殼聚糖復合溶液；

(4)石墨化碳-殼聚糖修飾電極的制備：將步驟(3)得到的石墨化碳-殼聚糖復合溶液修飾在步驟(2)預處理后的電極表面，干燥后得到石墨化碳-殼聚糖修飾電極，

(5)石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器的制備：將CA125抗體滴加到步驟(4)中得到的石墨化碳-殼聚糖修飾電極上，然后將電極放入牛血清蛋白(BSA)溶液中，取出后即得到石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器。

其中，利用活化材料對步驟(1)中得到石墨化碳進行活化，得到三維分層多孔石墨化碳；其中，活化材料含有NaOH或KOH，活化材料中所含羥基能夠使石墨化碳最大程度地多孔化。優選的，活化材料與石墨化碳的質量比范圍為1:1～5:1，活化材料若少于石墨化碳則活化程度低，活化材料過多則會產生原材料的浪費。進一步地，活化溫度范圍為500℃～800℃，在此溫度范圍內，石墨化碳活化反應進行徹底，同時不產生能源的浪費，石墨化碳比表面積和孔結構得到擴大，活化效果明顯。

其中，步驟(1)中引發劑、苯胺、植酸的摩爾比為2～3:2～7:1，能夠使得苯胺與植酸形成較為穩定的凝膠，便于石墨化碳的制備。

其中，步驟(1)中碳化溫度為400℃～900℃，此溫度能夠使植酸分解，保證碳化過程的進行，順利制備出石墨化碳。

其中，引發劑為硫酸銨溶液或過氧化氫溶液，這兩種引發劑不含金屬離子，氧化能力強，便于苯胺聚合，后處理方便。

本發明所述的石墨化碳-殼聚糖CA125免疫傳感器的使用方法包括以下步驟：