[發明專利]一種miR-92促進劑及其注射劑的制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910822122.1
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN110484537B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 強俊;何杰;徐跑;陶易凡;包景文;朱昊俊;曹哲明
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7115;A61P31/04;A61K9/08;A61K47/42
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

本發明提供了一種miR?92促進劑及其注射劑的制備方法和應用，屬于水產生物技術領域，所述miR?92促進劑為單鏈小RNA；所述單鏈小RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，具體為：5’?AAUUGCACUCGUCCCGGCCUGC?3’；所述單鏈小RNA的3’末端進行膽固醇修飾，3’末端四個堿基CUGC位置分別加入四個硫代骨架進行修飾，5’末端兩個堿基AA位置加入兩個硫代骨架進行修飾，全鏈進行2’甲基化修飾。本發明的miR?92促進劑能夠有效增強魚體內miR?92的表達，從而抑制其靶基因CaSR的表達；通過精準靶向分子生理干預，可以有效的增強巨噬細胞活性，提高其抗鏈球菌感染能力。

技術領域

本發明涉及水產生物技術領域，尤其涉及一種miR-92促進劑及其注射劑的制備方法和應用。

背景技術

鏈球菌是一種廣泛分布于自然界的革蘭氏陽性菌，是人類的重要病原之一，也是其他多種脊椎動物包括豬、牛、魚等的重要病原菌。目前已有多個國家報道了魚類鏈球菌病的暴發與流行，受感染的魚類包括多種海水和淡水魚類，以溫水性魚類最為嚴重。近年中國羅非魚鏈球菌感染的報道也呈現增加趨勢。

巨噬細胞是一種抗原遞呈細胞，同時具有很強的吞噬和消化異物抗原的能力，是固有免疫系統的主要效應細胞之一。鏈球菌感染能在短期內明顯刺激巨噬細胞功能呈現活躍狀態。因此，如何增強羅非魚頭腎巨噬細胞的呼吸爆發活性與吞噬活性，增加巨噬細胞吞噬病原菌的能力，從而達到促進羅非魚健康養殖的目的成為我們當前迫切需要解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種miR-92促進劑及其注射劑的制備方法和應用，該miR-92促進劑能夠增強羅非魚巨噬細胞呼吸爆發活性與吞噬活性，增加巨噬細胞吞噬病原菌的能力，從而達到促進羅非魚健康養殖的目的。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種miR-92促進劑，所述miR-92促進劑為單鏈小RNA；所述單鏈小RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，具體為：5’-AAUUGCACUCGUCCCGGCCUGC-3’；

所述單鏈小RNA的3’末端進行膽固醇修飾，3’末端四個堿基CUGC位置分別加入四個硫代骨架進行修飾，5’末端兩個堿基AA位置加入兩個硫代骨架進行修飾，全鏈進行2’甲基化修飾。

本發明還提供了一種包含上述方案所述miR-92促進劑的巨噬細胞。

本發明還提供了一種注射劑，包括以下原料：上述方案所述miR-92促進劑和PBS緩沖液；所述miR-92促進劑的質量與PBS緩沖液的體積的比例為20nmol:150μL～300μL。

本發明還提供了上述方案所述注射劑的制備方法，包括以下步驟：

將miR-92促進劑和PBS緩沖液混合，靜置后4000～6000rpm離心10～20s，取上清液得到注射劑。

本發明還提供了上述方案所述miR-92促進劑在增強羅非魚體內miR-92的表達中的應用。

本發明還提供了上述方案所述miR-92促進劑在制備增強巨噬細胞活性的藥物中的應用。

本發明還提供了上述方案所述miR-92促進劑在制備預防羅非魚鏈球菌感染的藥物中的應用。