[發(fā)明專利]一種核酸熒光原位檢測裝置及方法

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• 申請日: 2019-08-30
• 公開（公告）號: CN110484440A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發(fā)明（設計）人: 龔立康
• 申請（專利權）人: 希格諾(南京)生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/6841
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種核酸熒光原位檢測裝置，包括一對C型探針、觸發(fā)片段、若干熒光標記的發(fā)夾片段、目標序列，所述觸發(fā)片段與所述目標序列分別配合設置于一對所述C型探針的兩側，所述一對C型探針與所述目標序列配合結合；所述發(fā)夾片段上設置有部分序列、游離序列，所述觸發(fā)片段上設置有觸發(fā)序列，所述發(fā)夾片段的部分序列與所述觸發(fā)片段的觸發(fā)序列配對結合，所述發(fā)夾片段的游離序列與另一個所述發(fā)夾皮段的部分序列配對結合。本發(fā)明還提出檢測方法，本發(fā)明用一對C型探針和級聯(lián)放大信號系統(tǒng)兩項關鍵技術大幅提升了檢測的效率、精確度和準確度，最低可檢測到樣本中的單細胞單拷貝的目標序列，拓展了核酸原位雜交檢測技術的應用范圍。

技術領域

本發(fā)明涉及一種核酸熒光原位檢測裝置及方法，屬于生物檢測技術領域，可實現(xiàn)在組織原位精確地測定特定核酸序列。

背景技術

現(xiàn)有的核酸熒光原位雜交檢測技術主要是利用500堿基長度左右的探針，探針中摻有地高辛標記的核苷酸，當引物與目標序列結合后，加入熒光標記的地高辛抗體與引物上的地高辛結合，產生熒光信號，從而檢測出樣本中是否有目標序列。

發(fā)明內容

現(xiàn)有的技術方案主要存在以下兩個問題。

一是探針長度過長。這會帶來兩個問題。首先是反應效率問題，由于探針需要透過細胞膜上的空隙進入細胞內部與目標序列結合，探針長度過長會影響過膜效率，從而使得檢測的時間大大延長。其次，探針過長會導致非特異性結合，可能產生假陽性，影響檢測的精確度。

二是信號放大系統(tǒng)較弱。現(xiàn)有的技術方案是借助核苷酸的地高辛標記和熒光標記的地高辛抗體，探針攜帶的地高辛標記有限，因此信號放大能力一般，無法檢測出低豐度的目標序列，大大限制了現(xiàn)有技術的應用范圍。

本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種核酸熒光原位檢測裝置及方法。

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種核酸熒光原位檢測裝置，包括一對C型探針、觸發(fā)片段、若干熒光標記的發(fā)夾片段、目標序列，所述觸發(fā)片段與所述目標序列分別配合設置于一對所述C型探針的兩側，所述一對C型探針與所述目標序列配合結合；所述發(fā)夾片段上設置有部分序列、游離序列，所述觸發(fā)片段上設置有觸發(fā)序列，所述發(fā)夾片段的部分序列與所述觸發(fā)片段的觸發(fā)序列配對結合，所述發(fā)夾片段的游離序列與另一個所述發(fā)夾皮段的部分序列配對結合。

作為一種較佳的實施例，所述觸發(fā)片段的形狀為L型。

作為一種較佳的實施例，所述C型探針的長度為50堿基。

作為一種較佳的實施例，所述發(fā)夾片段的部分序列a-b，所述發(fā)夾片段的游離序列為a^*-b^*，所述觸發(fā)片段的觸發(fā)序列為a^*-b^*。

作為一種較佳的實施例，所述發(fā)夾片段包括發(fā)夾片段一，所述發(fā)夾片段一的部分序列和游離序列的順序為a-b-a^*-b^*。

作為一種較佳的實施例，所述發(fā)夾片段包括發(fā)夾片段二，所述發(fā)夾片段二的游離序列和部分序列的順序為b^*-a^*-b-a。

作為一種較佳的實施例，所述觸發(fā)片段的觸發(fā)序列響應于所述一對C型探針與所述目標序列配合結合并產生熒光信號。

本發(fā)明還提出一種核酸熒光原位檢測裝置的檢測方法，包括如下步驟：

步驟SS1：預處理目標樣本、陰性對照、陽線對照；

步驟SS2：加入C型探針和雜交液進行雜交1小時，用洗滌液洗滌3次；

步驟SS3：加入L型的觸發(fā)片段和雜交液進行雜交1小時，用洗滌液洗滌3次；