[發明專利]一種卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因及應用

有效

• 申請號: 201910815180.1
• 申請日: 2019-08-30
• 公開（公告）號: CN110643612B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 張殿昌;劉廣東;郭華陽;朱克誠;郭梁;劉寶鎖;張楠
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/46;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/10;C12R1/19
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華

本發明的第一個目的在于提供一種卵形鯧鲹抗菌肽NK?lysin基因及其編碼蛋白。本發明的第二個目的在于提供含有所述卵形鯧鲹抗菌肽NK?lysin基因的表達載體及利用該載體轉化的重組菌株。本發明的第三個目的在于提供一種制備重組卵形鯧鲹抗菌肽NK?lysin蛋白的方法。本發明的第四個目的在于提供所述卵形鯧鲹抗菌肽NK?lysin基因的應用。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因 及應用。

背景技術

抗菌肽(Antimicrobial Peptides，AMPs)是一種基因編碼，核糖體合成的小 于10kDa，具有總凈正電荷的小分子多肽。AMPs是生物體先天性免疫防御系統 的重要組成部分，在免疫方面發揮重要作用。

近年來，抗菌肽的開發和應用研究已成為國內外飼料科學和藥理學的研究熱 點，在動植物轉基因工程及藥物開發領域具有廣闊的應用前景。目前，在魚類中 已經發現80多種抗菌肽，其中NK-lysin是鞘脂激活蛋白樣蛋白(SALIP)家族 的成員，首次在豬毒性淋巴細胞中發現，是由細胞毒性T淋巴細胞(CTL)和 自然殺傷(NK)細胞產生抗微生物陽離子蛋白，并儲存在溶細胞顆粒中，具有 廣譜抗菌性。

NK-lysin具有保守的鞘脂激活蛋白B結構域和六個半胱氨酸，六個半胱氨 酸形成三個分子內二硫鍵，可通過其螺旋結構在細胞膜中形成孔，使得微生物的 脂質雙層膜以非特異性方式滲透。在大黃魚、大菱鲆、羅非魚等硬骨魚類研究表 明，NK-lysin不僅對細菌、真菌具有抗菌活性，對病毒和寄生蟲同樣也具有生物 活性。

卵形鯧鲹(Trachinotus Ovatus)具有生長速度快，經濟價值高，適合網箱養 殖等優點，已成為我國南方池塘和網箱養殖的主要品種，養殖年產量已超過10 萬噸。然而，隨著卵形鯧鲹養殖產業發展，再加上養殖環境日益惡化，卵形鯧鲹 養殖病害頻發，常引起較高死亡率，嚴重制約了卵形鯧鲹養殖產業的可持續發展。 傳統養殖過程中多采用抗生素進行治療，但長期使用抗生素不但污染養殖環境， 同時還會導致病原體產生抗藥性。因此，開發一種安全、高效的抗菌劑尤為重要。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因及其編碼 蛋白。

本發明的第二個目的在于提供含有所述卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的表 達載體及利用該載體轉化的重組菌株。

本發明的第三個目的在于提供一種制備重組卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin蛋白 的方法。

本發明的第四個目的在于提供所述卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的應用。

本發明的第一個目的通過以下技術方案實現：

一種卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

如SEQ ID NO.3所示為卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的cDNA，其全長是通 過卵形鯧鲹轉錄組測序和基因組測序結果綜合檢索分析獲得。

上述卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的編碼蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

表達上述卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的編碼蛋白的抗菌肽成熟肽的基因 序列是以卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的全長雙鏈cDNA為模板，經PCR方法 擴增獲得，它來源于卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的成熟肽區域所對應的的基 因片段，其為所述卵形鯧鲹抗菌肽NK-lysin基因的cDNA序列210bp至506bp (相當于第50至第147位氨基酸)的片段。