[發(fā)明專利]一種新型雙功能抗體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910799056.0
• 申請日: 2019-08-27
• 公開（公告）號: CN110551222B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛良鵬;余琳;鄒賢剛
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市畜牧科學(xué)院;重慶金邁博生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/13
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責(zé)任公司 50209
• 代理人: 文巍

本發(fā)明提供了一種抗體，包含了蛋白二聚體，所述蛋白二聚體包括：第一功能域，它包含免疫球蛋白鏈或特異性識別特定抗原的抗體結(jié)合位點；第二功能域，它包含免疫球蛋白鏈或特異性識別特定抗原的抗體結(jié)合位點，其特征在于：所述第一功能域由第一VH結(jié)構(gòu)域和第一VL結(jié)構(gòu)域組成，第二功能域由第二VH結(jié)構(gòu)域組成。VH為重鏈可變區(qū)，VL為輕鏈可變區(qū)。本發(fā)明提供的雙功能抗體，半衰期大大提高；且同源二聚體極少，即使出現(xiàn)聚集體，僅一次純化就可鑒別和去除。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種雙功能抗體，具體涉及新型雙功能抗體。

背景技術(shù)

雙特異性抗體(BsAb)又稱雙功能抗體，可同時識別和結(jié)合兩種不同的抗原和表位，并阻斷兩種不同的信號通路以發(fā)揮其作用。根據(jù)不同結(jié)構(gòu)可將雙特異性抗體結(jié)構(gòu)主要有2大類：含F(xiàn)c片段的雙特異性抗體(IgG-like雙特異性抗體)與不含F(xiàn)c片段的雙特異性抗體(non-IgG-like雙特異性抗體)。

雙特異性抗體的一個重要作用機(jī)制是介導(dǎo)免疫細(xì)胞殺傷，雙特異性抗體有兩條抗原結(jié)合臂，其中一條與靶抗原結(jié)合，另一條與效應(yīng)細(xì)胞上的標(biāo)記抗原結(jié)合，后者可以激活效應(yīng)細(xì)胞，使其靶向殺傷腫瘤細(xì)胞。目前已經(jīng)批準(zhǔn)上市的2個雙特異性抗體產(chǎn)品都屬于這個類別，Trion?Pharma公司開發(fā)的catumaxomab能夠靶向腫瘤表面抗原EpCAM和T細(xì)胞表面受體CD3，而Micromet公司和Amgen公司開發(fā)的Blinatumomab可以同時結(jié)合CD19和CD3。兩者都是通過激活并召集殺傷性T細(xì)胞，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。但是blinatumomab抗體，已被證明只有幾個小時很短的血液半衰期。

但是目前已有的多種雙功能抗體形式普遍面臨易聚集、純化產(chǎn)量低、穩(wěn)定性差或血液半衰期短等問題。CN104829726A提供了一種雙特異性CD19XCD3抗體，但是該抗體易于形成同源二聚體，難以鑒別、去除，極大增加了純化和鑒定難度，使其工業(yè)化應(yīng)用收到限制。

肝細(xì)胞肝癌占原發(fā)性肝癌的70-90％，許多病人被確診時已是晚期不能進(jìn)行外科手術(shù)切除或射頻消融等方法。目前臨床被批準(zhǔn)用于晚期HCC治療的藥物只有Sorafenib、Regorafenib和Lenvatinib多靶點激酶抑制劑，但仍對一些患者治療有限，迫切需要新的治療方式聯(lián)合治療。重新定向T細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞的策略已被證明能夠有效的治療或輔助治療癌癥，如已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)上市的CD3/CD19的雙功能抗體Blinatumomab，用于治療復(fù)發(fā)或難治性前體B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病等。目前已有數(shù)十個靶向T細(xì)胞表面CD3分子來富集T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞(實體瘤、血液瘤)的雙功能抗體正在將進(jìn)行臨床實驗。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是一種硫酸乙酰肝素蛋白類聚糖，通過細(xì)胞頂膜上的糖基磷脂酰肌醇(Glycosyl-phosphatidylinositol,GPI)錨定連接于細(xì)胞表面。GPC3是近年發(fā)現(xiàn)的HCC細(xì)胞表面特異性膜蛋白，是良好的免疫治療靶點，目前已有幾個抗GPC3單克隆抗體，如hGC33(中外制藥株式會社，專利號CN101186650A)和YP7(美國國立衛(wèi)生研究院國家癌癥研究所，專利號CN104520331)，被報道能誘發(fā)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)抑制肝癌裸鼠移植的生長。

將靶向GPC3的單克隆抗體與靶向T細(xì)胞表面CD3構(gòu)建雙功能抗體是治療GPC3陽性腫瘤的重要方向。目前已有多種雙功能抗體形式，但普遍面臨易聚集、純化產(chǎn)量低、穩(wěn)定性差或血液半衰期短等問題。比如CN107556387A提供了一種鏈?zhǔn)娇?GPC3/CD3雙特異性抗體，雖然能特異地識別并結(jié)合GPC3抗原和GPC3過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，介導(dǎo)T細(xì)胞發(fā)揮殺傷作用，但是該結(jié)構(gòu)同blinatumomab抗體BITE結(jié)構(gòu)類似，已被證明只有幾個小時很短的血液半衰期。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)的上述技術(shù)問題。本發(fā)明提供了一種既能夠保持雙功能抗體功效，又易于鑒定、純化和生產(chǎn)的雙功能抗體。

本發(fā)明的目的是通過以下措施實現(xiàn)的：