[發(fā)明專利]一種異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3及編碼基因及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910798929.6
• 申請(qǐng)日: 2019-08-28
• 公開（公告）號(hào): CN110438101B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉江;陳建華;周誠;謝叢薇;肖新力;楊才瓊;李曉曼;肖媛;黃祥慶;杜俊波;張靜;王小春;楊峰;武曉玲;楊文鈺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12P17/06
• 代理公司: 成都九鼎天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51214
• 代理人: 易小藝

1.一種異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3或其編碼基因的應(yīng)用，其特征在于：所述異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3或其編碼基因在以染料木素為底物制備鷹嘴豆素A中的應(yīng)用；所述異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3或其編碼基因的應(yīng)用，其特征在于：鷹嘴豆素A的制備方法包括以下步驟：

(1)獲取轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3蛋白質(zhì)并純化；

(2)配制催化反應(yīng)體系：反應(yīng)體系以100μL計(jì)算：其中包括Tris-HCl緩沖液180-220mM，S-腺苷甲硫氨酸0.9-1.1mM，DTT(二硫蘇糖醇)3-5mM，MgCl₂ 0.8-1.2mM，轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3 7-9μg，染料木素0.15-0.25mM，ddH₂O(雙蒸水)補(bǔ)齊至100μL，pH值為7.9-8.2；

(3)在溫度37℃反應(yīng)30min，加入100μL乙腈終止反應(yīng)；

(4)步驟(3)終止反應(yīng)后的溶液經(jīng)提純后即得鷹嘴豆素A。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3或其編碼基因的應(yīng)用，其特征在于：所述反應(yīng)體系以100μL計(jì)算：其中包括Tris-HCl緩沖液200mM，S- 腺苷甲硫氨酸 1 mM，DTT 4mM，MgCl₂ 2mM，轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3 8μg，染料木素0.2mM，ddH₂O補(bǔ)齊至100μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3或其編碼基因的應(yīng)用，其特征在于：編碼異黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶GmIOMT3的基因在以染料木素為底物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。