[發(fā)明專利]酪蛋白磷酸肽及其制備方法、應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910790806.8
• 申請日: 2019-08-26
• 公開（公告）號: CN110483622A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅珍;夏祖猛;陳媛媛;羅琥捷;李文治
• 申請（專利權(quán)）人: 無限極(中國)有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12P21/06;C07K14/47;A23L33/18;A61K38/10;A61P3/14
• 代理公司: 11227 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 劉穎<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發(fā)明涉及多肽領(lǐng)域，特別涉及酪蛋白磷酸肽及其制備方法、應(yīng)用。本發(fā)明以牛乳中酪蛋白為原料，經(jīng)過胰蛋白酶和復(fù)合蛋白酶(胰蛋白酶和中性蛋白酶)酶解、滅酶、離心、調(diào)節(jié)等電點/醇沉除雜、干燥等工藝制備具有持鈣活性強的酪蛋白磷酸肽。本發(fā)明所得特殊的簇磷酸絲氨酸結(jié)構(gòu)具有螯合鈣的能力，能夠有效促進鈣的吸收和利用。本發(fā)明制備的乳源性酪蛋白磷酸肽分子量主要在1000?5000之間，有利于人體吸收。酪蛋白磷酸肽的含量在85％以上，其收率可達到25％。是一種成本低，工藝簡單的制備方法，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽領(lǐng)域，特別涉及酪蛋白磷酸肽及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)

酪蛋白磷酸肽(CPP)是以牛乳酪蛋白為原料，通過生物技術(shù)制得，具有促進鈣、鐵、鋅等二價金屬離子吸收和利用的多肽，可用于各種營養(yǎng)、保健食品。酪蛋白磷酸肽是用胰蛋白酶及中性蛋白酶水解的多肽，經(jīng)過精制、純化制成，其核心結(jié)構(gòu)為：—Ser(P)－Ser(P)－Ser(P)－Glu－Glu－(Ser：絲氨酸，Glu：谷氨酸，P：磷酸基)。這一結(jié)構(gòu)中的磷酸絲氨酸殘基(－Ser(P)－)成簇存在，在腸道pH弱中性環(huán)境下帶負電荷，可阻止消化酶的進一步作用，使酪蛋白磷酸肽不會被進一步水解。酪蛋白磷酸肽能在小腸下端pH 7.0-8.0環(huán)境下與鈣結(jié)合而抑制磷酸鈣沉淀的形成，使游離鈣保持較高的濃度，促進鈣的被動吸收，現(xiàn)已作為功能因子添加到保健品及乳品等食品中。

目前多采用在酪蛋白中加入蛋白酶進行酶解反應(yīng)，利用超濾膜分離出酶解產(chǎn)物酪蛋白磷酸肽，產(chǎn)物酪蛋白磷酸肽經(jīng)納濾膜脫鹽處理后獲得。該方法操作簡單，設(shè)備要求低，收率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，而且反應(yīng)溫度低，能實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，但其采用單一蛋白酶酶解，酪蛋白磷酸肽得率和含量較低(最高產(chǎn)品含量為16％左右)。

此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員多采用一種利用胰蛋白酶酶解乳源性酪蛋白為原料制備酪蛋白磷酸肽的方法，主要通過胰蛋白酶水解、滅酶、超濾、冷凍干燥或噴霧干燥等工藝制備了天然、安全，無毒副作用、成本低的酪蛋白磷酸肽混合樣品。但也未對酪蛋白磷酸肽含量進行測定，不能規(guī)范化產(chǎn)品質(zhì)量，也無法準確評價其藥效。

因此，提供一種酪蛋白磷酸肽及其制備方法具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了酪蛋白磷酸肽及其制備方法、應(yīng)用。本發(fā)明提供了高活性酪蛋白磷酸肽，用于補充鈣的食品或藥品中，以促進鈣的吸收利用。本發(fā)明還提供了一種制備上述高活性酪蛋白磷酸肽的方法，該肽主要活性成分明確，促鈣吸收效果好，工藝簡潔，可實現(xiàn)量產(chǎn)，能規(guī)范化產(chǎn)品質(zhì)量。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種多肽，有且僅含有1個、2個或4個磷酸絲氨酰簇。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述多肽的功能區(qū)結(jié)構(gòu)選自β(48～63)1P、αS1(58～73)2P、αS1(119～134)1P、β(48-67)1P或β(17-40)4P。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述多肽具有(Ⅰ)、(Ⅱ)所示的氨基酸序列中任意一個：

(Ⅰ)具有SEQ ID NO:1～5任一項所示的氨基酸序列；

(Ⅱ)具有SEQ ID NO:1～5任一項所示的氨基酸序列經(jīng)修飾、取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸獲得的氨基酸序列。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述修飾包括酰胺化、磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化、糖基化或羰基化。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述取代為取代1個、2個、3個、4個或5個氨基酸。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述缺失為缺失1個、2個、3個、4個或5個氨基酸。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述添加為添加1個、2個、3個、4個5個、6個、7個、8個、9個或10個氨基酸。