[發明專利]一種一體化核酸檢測器件及應用

在審

• 申請號: 201910776422.0
• 申請日: 2019-08-22
• 公開（公告）號: CN110564603A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 陳柱;何農躍;李松;鄧燕;周楓林
• 申請（專利權）人: 南京艾瑞譜生物技術有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/6844;G01N35/00;G01N35/02;G01N35/04
• 代理公司: 32346 江蘇瑞途律師事務所
• 代理人: 陳彬

本發明公開了一種一體化核酸檢測器件及應用，包括殼體、試劑存儲單元、移液單元、導軌、旋轉盤和設在殼體上的探測孔，所述導軌沿殼體軸向貫穿，所述試劑存儲單元和旋轉盤位于導軌的下方，所述移液單元通過沿導軌運動在試劑存儲單元和旋轉盤之間轉移液體。本發明的裝置通過移液單元沿導軌運動在試劑存儲單元完成一系列反應，再通過移液單元沿導軌運動與旋轉盤轉動相互配合，將反應后溶液分裝至旋轉盤內部的孔道，所述溶液和旋轉盤內預裝的試劑反應，完成PCR擴增及檢測反應，再配合旋轉盤轉動使待測溶液對準探測孔，對DNA或RNA擴增產物進行檢測，通過簡單的操作可以在裝置內完成核酸擴增中變性、退火、延伸過程，大大提高了檢測速度。

技術領域

本發明屬于核酸檢測器件技術領域，具體的涉及一種一體化核酸檢測器件及應用方法。

背景技術

常規的微生物核酸檢測過程包括樣本前處理(核酸提取)、核酸擴增、核酸檢測三個步驟。核酸提取；核酸檢測首先要進行樣本核酸提取；常見方法有乙醇沉淀法、硅膠柱法、玻璃珠法、磁珠法；所有方法基本原理都是裂解樣本、結合、清洗、洗脫等四個步驟。單個樣本整個過程約40分鐘到數小時，有時會接觸到有毒物質。核酸擴增；常用方法有變溫擴增(如PCR)和等溫擴增(如LAMP)，都是一種核酸體外擴增技術；PCR擴增是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程；等溫擴增反應過程始終維持在恒定的溫度下，通過添加不同活性的酶和各自特異性引物來達到快速核酸擴增的目的。核酸檢測；瓊脂糖凝膠/聚丙烯酰胺凝膠電泳方式，包括制膠、加樣和電泳、檢測等過程；通過測序和表達方式來檢測；通過熒光染料或濁度變化來對擴增產物定性或定量檢測；其操作步驟都是耗時耗力，成本高。

完成一個從原始樣本到最終檢測的所有試驗環節，整個過程需要5～8小時，甚至更長，在每個試驗環節都需要標記試管以免弄錯樣本，費事費力；操作人員容易接觸有毒試劑，頻繁開閉試劑管容易被環境污染，同時試劑盒和產物也會污染環境；因此，需要配置相關配套設施，保證純凈的實驗環境。此外，多個指標檢測其工作量更大。

針對上述復雜試驗過程，每個步驟市場上有一些儀器替代人工操作，如核酸提取儀、核酸擴增儀、實時熒光定量儀、環介導等溫擴增儀等；目前，移液工作站是自動化程度較高，包括核酸前處理、反應配置、溫度控制、混勻等，將所需的配套試劑放置于工作站臺上，設置好程序，可以完成核酸提取和核酸擴增全過程。由于移液工作站為開放平臺，在整個多不試驗操作過程中，操作者需要不定期進行96孔板封膜、開?；虿欢ㄆ谶M行大量的管蓋開閉工作，雖然一部分工作由工作站來完成，但整個仍需要人工大量介入，無法實現整個過程的無人值守。

經檢索，相關的自動化核酸檢測器件已得到公開，如中國專利申請號為201620190468.6，公開日期為2016.08.10的申請案公開了一種全自動的核酸檢測器件，包括以上下次序相互連接的上蓋和下蓋，所述上蓋的上側和下蓋的下側分別設置有固定機構；所述下蓋內設置有開口向上的加樣器，上蓋上相對于該加樣器設置有從上到下貫穿上蓋的插孔；所述上蓋的固定機構為上蓋上表面中心位置設置的三角槽，所述下蓋的固定機構為下蓋側壁下端位置設置的卡槽。該裝置在使用時通過三角槽跟轉軸進行上蓋1的固定，然后取出針頭瓶內預置的針頭，并裝入相應規格的外部組件中。下蓋中可裝上裝有核酸提取和PCR所需的各種加樣器。試劑管的管口處有硅膠塞，在生產過程中，試劑管中加入試劑后蓋上硅膠塞，然后整個試劑管可按一定的次序插入下蓋預留的圓孔中固定。上蓋、下蓋相合后，將上蓋旋與下蓋相合的軌道中。通過操縱下蓋的轉動，使得所需加樣器到達針頭下方，再通過外部組件完成對各類試劑的取排工作。該裝置雖然能夠在可一定程度消除操作中的人為誤差，提高反應結果的準確性，減少操作人員的工作強度及危險性，然而該裝置并未在檢測速度上有所提高。

基于現有技術中存在的缺陷，亟需發明一種構造簡單，檢測速度快，成本低，能夠實現一體化檢測的器件。

發明內容

1.要解決的技術問題