[發明專利]一種優種板栗成熟胚組織培養快繁育苗的方法

有效

• 申請號: 201910769301.3
• 申請日: 2019-08-20
• 公開（公告）號: CN110402818B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 徐碧林;陳巖巖;鄭永良;高孟敏;謝艷陽;陶雷婷;任玉燕;萬達;黎爽
• 申請（專利權）人: 黃岡師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 李煒

1.一種優種板栗成熟胚組織培養快繁育苗的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)優種板栗的選取、清洗及消毒；

所述優種板栗為當季采收的飽滿、大小一致、無病蟲害的羅田“桂花香”板栗，貯藏于0～4℃冷藏柜中備用；

板栗種子的清洗包括以下步驟：選擇新鮮健康無裂口的板栗種子在自來水下沖洗20-30min，同時淘汰漂浮的種子；

板栗種子的消毒包括以下步驟：在超凈工作臺里，先用75％的酒精充分浸泡2min，無菌水洗2次，再用5％次氯酸鈉消毒6-10min，無菌水洗3-5次，用滅菌的吸水紙吸干表面；

(2)板栗成熟胚的獲取及接種；

所述板栗成熟胚的獲取方法：將板栗種子經清洗和消毒處理后，用無菌解剖刀破開并去除表皮，把板栗果實置于75％的酒精充分浸泡2min，用無菌水沖洗3遍；再放入5％的次氯酸鈉中浸泡3-5min，浸泡完畢后用無菌水沖洗果實3-5遍，然后置于裝有無菌吸水紙的平板中，吸干水分，以胚為中心切成帶胚乳的小方塊，作為外植體；

所述板栗成熟胚的接種方法：先將誘導培養基滅菌，用強堿溶液調pH至5.8～6.0，再將成熟胚接種至誘導培養基；所述誘導培養基為木本植物培養基WPM+1.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤6-BA+0.15mg/L萘乙酸NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7.0g/L；

(3)外植體的培養；

外植體培養包括初代培養、繼代培養和生根培養；

其中，

初代培養方法如下：將外植體接種至誘導培養基后，前兩周進行暗培養，待胚發芽至2-3cm時，移到光照培養室，室溫，空氣相對濕度65％，每個培養架的光照由3根40W的直管燈管提供，采用每日光培養12-16h和暗培養8-12h的光周期，生長4周，待芽苗高達6-8cm，長出3-4片嫩葉，葉片長度為1～2cm；

繼代培養方法如下：在無菌環境中，將初代培養得到的芽苗裁成包含1～2個腋芽的莖段，然后接種至繼代培養基，誘導不定芽萌發，得到叢生芽苗；

所述繼代培養的培養基為WPM+1.5mg/L玉米素ZT+0.15mg/L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7.0g/L，培養基滅菌前，將pH用1mol/L NaOH調至5.8～6.0；

所述生根培養的方法如下：在無菌條件下，用無菌剪刀剪去長度為3-4cm叢生芽苗的基端，接種至生根培養基，1周后轉接在1/2WPM培養基上，再培養3天即可生根，平均發根率為85％；

所述生根培養的培養基為WPM+0.4～1.2mg/L IBA+0.05mg/L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7.0g/L；培養基滅菌前，將pH用1mol/L NaOH調至5.8～6.0；

(4)組培苗的馴化煉苗。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步驟(4)中馴化煉苗方法如下：當生根苗生長4-6周后，移至溫室內按照煉苗技術規程進行煉苗4-8周，然后將煉好的板栗苗進行移栽，再對移栽的板栗苗進行正常的施肥、灌水及病蟲害管理。