[發明專利]一種快速發掘柑橘四倍體的方法

在審

• 申請號: 201910767573.X
• 申請日: 2019-08-20
• 公開（公告）號: CN110432140A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 解凱東;周銳;伍小萌;郭文武
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: A01H1/04
• 分類號: A01H1/04;A01G17/00
• 代理公司: 武漢華強專利代理事務所(普通合伙) 42237
• 代理人: 溫珊姍

本發明公開了一種快速發掘柑橘四倍體的方法，屬于植物多倍體育種技術領域。本發明方法根據柑橘根系、葉片和油胞的形態特征篩選疑似四倍體，與二倍體相比，四倍體的根系短粗、側根少，四倍體的葉片厚、寬、顏色深，四倍體的油胞大、密度低；篩選疑似四倍體再用流式細胞儀進行倍性鑒定。本發明結合對根、葉和油胞的形態特征進行初選，獲得四倍體的準確率可達85％以上，且用時短、操作簡單；通過本發明方法獲得的四倍體植株倍性穩定，不存在嵌合體。

技術領域

本發明屬于植物多倍體育種技術領域，具體涉及一種快速發掘柑橘四倍體的方法。

背景技術

柑橘是我國南方第一大果樹，我國柑橘產業近年來迅猛發展，已成為我國南方主產區農村經濟的一大支柱產業。柑橘多為二倍體，天然的四倍體資源十分稀缺。與二倍體相比，柑橘四倍體植株常表現出植株矮化、器官巨大和抗逆性強等優良特點，可用于柑橘砧木遺傳改良；柑橘四倍體育性正常，能產生可育配子，作為育種中間材料對三倍體無核育種也極具應用價值。因此，培育柑橘四倍體對柑橘砧木和接穗遺傳改良均具有重要意義。

目前獲得柑橘四倍體的方法主要包括：1)細胞融合，但該方法由原生質體再生到獲得完整植株耗時較長。2)化學誘導，指通過化學試劑如秋水仙素、胺磺靈等對植物體進行處理獲得多倍體，但該方法易獲得嵌合體，倍性不穩定。3)從二倍體實生后代中發掘四倍體，柑橘多數品種具有多胚性且珠心細胞存在自然加倍現象，從柑橘多胚性品種實生后代中發掘四倍體已成為獲得柑橘四倍體的一個便捷方法。柑橘四倍體與二倍體在植株形態上往往存在較大差異，通過形態學初選結合流式細胞儀倍性鑒定可快速獲得四倍體(梁武軍等.10個柑橘砧木類型同源四倍體的發掘與SSR鑒定.果樹學報，2014，31：1-6；梁武軍等.柑橘10個品種實生后代多倍體的發掘及SSR鑒定.園藝學報，2014，41：409-416)。但目前現有的方法以觀察葉片形態特征為主，初選準確率不高，平均值僅35％左右；且種子均采用露地實生播種，受季節和環境限制，萌發率低，從播種到幼苗長至3-4片真葉耗時較長，一般需60–90天(梁武軍等.10個柑橘砧木類型同源四倍體的發掘與SSR鑒定.果樹學報，2014，31：1-6；梁武軍等.柑橘10個品種實生后代多倍體的發掘及SSR鑒定.園藝學報，2014，41：409-416)。

發明內容

本發明的目的在于解決現有方法存在的種子露地播種成苗時間長和初選準確率低等問題，提供一種快速發掘柑橘四倍體的方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種快速發掘柑橘四倍體的方法，若柑橘葉片沒有油胞，根據根系、葉片的形態特征區別篩選疑似柑橘四倍體。所述的根系的形態特征區別包括：與二倍體相比，四倍體的根系短粗、側根少；所述的葉片的形態特征區別包括：與二倍體相比，四倍體的葉片厚。進一步地，四倍體的根系長度在二倍體的60％以下，根系粗度在二倍體的1.5倍以上，側根數目在二倍體的30％以下，葉片厚度在二倍體的1.1倍以上。更進一步地，根系粗度在二倍體的1.5～2.0倍之間，葉片厚度在二倍體的1.1～1.5倍之間。

進一步地，所述的葉片的形態特征區別還包括：與二倍體相比，四倍體的葉片顏色深，葉片寬。

所述的快速發掘柑橘四倍體的方法，若柑橘葉片有油胞，在上述根系、葉片形態特征區別的基礎上，再結合葉片油胞的形態特征區別篩選疑似柑橘四倍體。所述的油胞的形態特征區別包括：與二倍體相比，四倍體的油胞密度低。進一步地，四倍體的油胞密度在二倍體的60％以下。

進一步地，所述的油胞的形態特征區別還包括：與二倍體相比，四倍體的油胞大。