[發明專利]一種文蛤殼色的分子標記及其鑒定方法與應用試劑盒

在審

• 申請號: 201910765339.3
• 申請日: 2019-08-19
• 公開（公告）號: CN110317886A
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 聶鴻濤;鄭軍紅;閆喜武;楊鳳
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

本發明公開了一種文蛤殼色的分子標記及其鑒定方法與應用試劑盒，屬于分子生物學技術領域。本發明所述文蛤殼色的分子標記的核苷酸序列為SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.22或SEQ ID NO.23。用于檢測權利要求1所述的文蛤殼色的分子標記的PCR擴增特異性引物對的核苷酸序列：所述檢測SEQ ID NO.9的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述檢測SEQ ID NO.11的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述檢測SEQ ID NO.22的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；所述檢測SEQ ID NO.23的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。本發明為研究文蛤不同殼色的基因表達調控提供了理論基礎，為進一步揭示文蛤殼色的遺傳基礎與分子機制提供參考。

技術領域

本發明涉及一種文蛤殼色的分子標記及其鑒定方法與應用試劑盒，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

貝類的殼色是由外套膜表皮分泌形成的。研究表明：殼色與貝類的生態、行為和生長等表型性狀相關，不同殼色的群體之間的生長及其遺傳結構存在差異。在海灣扇貝(Argopecten irradians)、菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)和長牡蠣(C.gigas)等貝類中利用殼色作為遺傳標記進行選育已取得了很大進展。吳楊平等報道了紅殼色文蛤選育子一代的表型遺傳分離規律，研究結果表明：文蛤殼色具有多態性，紅殼色親本的子代中出現紅色，符合孟德爾遺傳規律，為文蛤殼色定向選育奠定了基礎。大多數貝類殼色遺傳研究也表明：單個或少數基因位點調控貝類的殼色，這有利于通過分子手段篩選與殼色相關的分子標記，同時有助于研究與貝類生長、發育及成活之間的關系，有利于開展貝類殼色與生產性狀的協同選育。

SRAP標記通過PCR特異擴增的差異序列設計引物轉化成SCAR(SequenceCharacterized Amplified Regions)標記。SCAR標記具有特異性高、操作簡便和重復性較高等特點，有效的克服了SRAP標記的缺點，被廣泛應用于動植物等的研究中。

發明內容

本發明通過SRAP-cDNA差異分析，篩選與文蛤殼色表型差異相關序列，通過克隆、測序及比對，獲得與殼色形成相關的基因或蛋白序列，以便為文蛤殼色選育及遺傳表達規律提供科學理論依據。

本發明的目的在于提供一種文蛤殼色的分子標記，所述分子標記的核苷酸序列為SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.22或SEQ ID NO.23。

進一步地，上述技術方案中，用于檢測權利要求1所述的文蛤殼色的分子標記的PCR擴增特異性引物對，所述檢測SEQ ID NO.9的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示；所述檢測SEQ ID NO.11的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示；所述檢測SEQ ID NO.22的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；所述檢測SEQ ID NO.23的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

本發明還提供了一種文蛤殼色的分子標記的鑒定方法，其特征在于，所述方法包括：以文蛤殼的總DNA為模板，利用權利要求2所述的引物進行PCR擴增反應，并對擴增產物進行電泳檢測。

進一步地，上述技術方案中，所述PCR擴增反應的體系為：

所述正向引物/反向引物為SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3/SEQ IDNO.4或SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8。