[發(fā)明專利]滋養(yǎng)層細(xì)胞株及其制備方法和體外誘導(dǎo)擴(kuò)增NK細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910763114.4
• 申請(qǐng)日: 2019-08-19
• 公開（公告）號(hào): CN112391349B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 請(qǐng)求不公布姓名
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉韜
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;C12N5/0783
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 張楊梅

1.一種利用滋養(yǎng)層細(xì)胞體外誘導(dǎo)擴(kuò)增NK細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

提供滋養(yǎng)層細(xì)胞，所述滋養(yǎng)層細(xì)胞的制備方法包括以下步驟：提供慢病毒，所述慢病毒的基因組包括：用于表達(dá)IL-15的第一基因片段、用于表達(dá)自剪切多肽P2A的第二基因片段和用于表達(dá)4-1BBL的第三基因片段，所述第一基因片段、所述第二基因片段和所述第三基因片段依次設(shè)置；將所述慢病毒感染K562細(xì)胞，篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆，構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，獲得滋養(yǎng)層細(xì)胞K562-IL15-41BBL；其中，所述慢病毒的基因組包括如SEQ?ID?No.1所示的基因片段，所述基因片段在K562細(xì)胞內(nèi)表達(dá)為重組蛋白：CD8α信號(hào)肽-IL15-CD8α跨膜區(qū)-P2A-41BBL；所述慢病毒感染K562細(xì)胞的步驟中，以感染復(fù)數(shù)為30，將所述慢病毒與所述K562細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)；所述篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆的步驟中，加入嘌呤霉素進(jìn)行抗性篩選；

將所述滋養(yǎng)層細(xì)胞K562-IL15-41BBL進(jìn)行100Gy輻照處理，然后加入PMBC細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為16天以上；其中，所述PBMC細(xì)胞與所述滋養(yǎng)層細(xì)胞株的細(xì)胞數(shù)量比為3:0.5。