[發明專利]一種核酸適配子、其獲得方法、其衍生物及其應用

有效

• 申請號: 201910759904.5
• 申請日: 2019-08-16
• 公開（公告）號: CN110408620B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 許杰華;張桂雄;黃文山
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第三醫院
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 廣州匯盈知識產權代理事務所(普通合伙) 44603
• 代理人: 童衛忠

本發明公開了一種核酸適配子、其獲得方法、其衍生物及其應用，核酸適配子的序列為5’?GACCCTGACTNACACGGTG?3’；N為隨機序列；核酸適配子的獲得方法：截短步驟：將靶向人肝癌細胞HepG2的適配子JHIT從5’端和3’端進行核苷酸的截短；適配子JHIT的序列為5’?AGAGACCCTGACTNACACGGTGGCTTCTT?3’；N為隨機序列；預測步驟：預測經截短的適配子JHIT為含有二級結構，選擇最短序列，得到核酸適配子；核酸適配子的應用為將核酸適配子用于識別肝癌細胞HepG2；核酸適配子易進行結構??活性關系研究，可作為代替特異性抗體的靶向探針進行后續的肝細胞癌的診斷與治療。

技術領域

本發明涉及一種核酸適配子、其獲得方法、其衍生物及其應用，屬于分子生物技術領域。

背景技術

寡核苷酸適配子(aptamer)也叫適配子、適配體或核酸適體，是用指數富集配基的系統進化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELE X)技術，通過體外篩選、擴增和富集獲得的、能和小分子物質、多肽、蛋白質、細胞器、核酸及細胞和組織等靶物質高親和性、高特異性結合的單鏈DNA/RN A寡核苷酸，其與靶點結合的結構基礎是因其可折疊成獨特的二級或三級結構從而對靶標有非常高的親和力和特異性。適配子的作用類似于抗體，凡是涉及抗體的應用領域，幾乎都可以用寡核苷酸適配子代替。由于適配子的特異結合性，因此可用于篩選和識別靶標物質，在藥物篩選、分析檢測等領域都有廣泛的應用。

對于肝癌，由于患者癥狀的顯現較晚，多數肝癌患者診斷時已為晚期，即使早期發現，術后復發率也非常高，嚴重威脅我國人民健康，肝癌靶向劑對于晚期肝癌、術后腫瘤復發的特異性診斷、治療均具有重要意義，適配子可用于肝癌靶標的確定，進一步提高其特異性和親和力則有利于加快診斷速度、提高精確性。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的第一個目的在于提供一種核酸適配子，該核酸適配子的結構得到了優化，親和力和特異性大大提高。

本發明的第二個目的在于提供上述核酸適配子的獲得方法。

本發明的第三個目的提供上述核酸適配子的衍生物，該衍生物具有與核酸適配子相同或類似的功能。

本發明的第四個目的在于提供上述核酸適配子的應用。

實現本發明的第一個目的可以通過采取如下技術方案達到：

一種核酸適配子，核酸適配子的序列為5’-GACCCTGACTNACACGGTG- 3’；N為隨機序列；如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，隨機序列N為GCGAACCCAATCGCACCACATCTCAACATGT GG，如SEQ ID NO.2所示。

進一步地，核酸適配子的Kd值為12.18±4.93nM。

進一步地，核酸適配子包括二級結構。

進一步地，二級結構為莖環結構。

進一步地，隨機序列包含于莖環結構中。

實現本發明的第二個目的可以通過采取如下技術方案達到：一種核酸適配子的獲得方法，包括：

截短步驟：將靶向人肝癌細胞HepG2的適配子JHIT從5’端和3’端進行核苷酸的截短；適配子JHIT的序列為5’-AGAGACCCTGACTNACACGGTGGCT TCTT-3’；N為隨機序列，如SEQID NO.3所示；

預測步驟：預測經截短的適配子JHIT為含有二級結構，選擇最短序列，得到核酸適配子。

進一步地，截短步驟中，適配子JHIT通過Cell-SELEX技術篩選得到。